| 导师简介 | 第1页 |
| 课题组成员 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 主要符号表 | 第13-14页 |
| 第一部分 前言 | 第14-18页 |
| ·南极磷虾研究开发现状 | 第14-15页 |
| ·胰蛋白酶的研究现状 | 第15-16页 |
| ·南极磷虾酶的应用价值 | 第16-18页 |
| 第二部分 南极磷虾胰蛋白酶 cDNA 的克隆与鉴定 | 第18-37页 |
| ·实验仪器与材料 | 第18-20页 |
| ·实验组织样本 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-28页 |
| ·南极磷虾基因组 DNA 的获得 | 第20页 |
| ·南极磷虾胰蛋白酶基因片段的获得 | 第20-22页 |
| ·南极磷虾胰蛋白酶全基因序列的获得 | 第22-26页 |
| ·南极磷虾胰蛋白酶 cDNA 的获得 | 第26-28页 |
| ·实验结果 | 第28-35页 |
| ·提取南极磷虾胰蛋白酶基因克隆结果 | 第28-30页 |
| ·重组质粒 PCR 及酶切鉴定 | 第30页 |
| ·南极磷虾胰蛋白酶的全基因序列图及开放阅读框（ORF）结构图 | 第30-32页 |
| ·南极磷虾总 RNA 电泳结果 | 第32页 |
| ·南极磷虾胰蛋白酶 cDNA 电泳结果 | 第32-33页 |
| ·多物种胰蛋白酶氨基酸多序列分析 | 第33-34页 |
| ·系统进化树分析 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·结论 | 第36-37页 |
| 第三部分 南极磷虾胰蛋白酶基因表达载体的构建 | 第37-45页 |
| ·实验材料和试剂 | 第37-38页 |
| ·菌株与载体 | 第37页 |
| ·LB 固体和液体培养基 | 第37页 |
| ·实验试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·质粒 pGEX-2T 的验证 | 第38页 |
| ·双酶切南极磷虾胰蛋白酶 cDNA | 第38-39页 |
| ·双酶切质粒 pGEX-2T | 第39页 |
| ·连接并转化 E.coli BL21 感受态细胞 | 第39-40页 |
| ·筛选并验证 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-43页 |
| ·质粒完整性验证结果 | 第40-41页 |
| ·双酶切 pGEX-2T 及南极磷虾胰蛋白酶 cDNA | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·结论 | 第44-45页 |
| 第四部分 融合蛋白的表达、鉴定与纯化 | 第45-55页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·菌株 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45-47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·表达 | 第47-49页 |
| ·优化表达条件 | 第49页 |
| ·纯化 | 第49-50页 |
| ·测定酶活性 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-54页 |
| ·初步表达的 SDS-PAGE 分析 | 第51-52页 |
| ·优化条件表达的 SDS-PAGE 分析 | 第52-53页 |
| ·Glutathione Sepharose 4B 纯化后的 SDS-PAGE 分析 | 第53页 |
| ·蛋白纯化前后的蛋白浓度测定 | 第53-54页 |
| ·酶活力测定结果 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54页 |
| ·结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 综述 | 第58-65页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 攻读学位期间已（待）发表的文章 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
