| 符号说明 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-19页 |
| 1 前言 | 第19-50页 |
| ·马立克氏病（MD）的研究进展 | 第19-27页 |
| ·病原学 | 第20-21页 |
| ·流行病学 | 第21-22页 |
| ·感染机制及病理变化 | 第22-24页 |
| ·诊断技术 | 第24-26页 |
| ·致病性及疾病防制策略 | 第26-27页 |
| ·MDV 分子生物学研究进展 | 第27-32页 |
| ·MDV 基因组结构 | 第27-29页 |
| ·MDV 结构蛋白及相关基因 | 第29-32页 |
| ·禽反转录病毒与 MDV 基因重组的研究进展 | 第32-35页 |
| ·病毒的变异 | 第32页 |
| ·MDV 与 REV 间基因重组 | 第32-33页 |
| ·MDV 与 ALV 间基因重组 | 第33-34页 |
| ·REV 与 MDV 基因重组的机制 | 第34页 |
| ·不同病毒间遗传重组流行病学意义 | 第34-35页 |
| ·DNA 片段克隆的载体系统 | 第35-41页 |
| ·质粒 | 第35-36页 |
| ·粘粒 | 第36-37页 |
| ·BAC 的优势及其发展 | 第37-41页 |
| ·MD 的防制 | 第41-44页 |
| ·免疫机理 | 第41页 |
| ·疫苗研究进展 | 第41-42页 |
| ·目前 MDV 疫苗的种类 | 第42-44页 |
| ·禽流感研究进展 | 第44-46页 |
| ·病毒病原学 | 第44-45页 |
| ·禽流感的流行病学 | 第45页 |
| ·禽流感的传播方式 | 第45-46页 |
| ·H9N2 亚型禽流感的防制 | 第46-49页 |
| ·全病毒灭活疫苗 | 第46页 |
| ·亚单位疫苗 | 第46页 |
| ·DNA 疫苗 | 第46-47页 |
| ·表位疫苗 | 第47页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第47-49页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第49-50页 |
| 2 材料和方法 | 第50-91页 |
| ·主要实验耗材和仪器 | 第50-52页 |
| ·分子克隆相关试剂 | 第50页 |
| ·常规细胞培养相关试剂 | 第50页 |
| ·其他主要试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50-51页 |
| ·相关菌种、病毒株及载体 | 第51-52页 |
| ·抗H9N2-HA鼠多克隆抗体的制备及H9N2-HA真核表达载体的构建 | 第52-60页 |
| ·H9N2-HA 高免血清的制备 | 第52-57页 |
| ·HA 真核表达载体的构建 | 第57-60页 |
| ·一株表达 H9N2-HA 基因的重组 rGX-CMV-HA 的构建 | 第60-68页 |
| ·原理 | 第60-62页 |
| ·含有 HA 表达盒的外源基因与 GX0101ΔMeq 的重组 | 第62-64页 |
| ·利用 Flp/FRT 重组系统敲出 kanr抗性筛选基因 | 第64-65页 |
| ·大量提取重组质粒 | 第65-66页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第66-67页 |
| ·rGX-CMV-HA 的生物学活性检测 | 第67-68页 |
| ·重组 MDV 中不同启动子转录 H9N2-HA 基因的活性比较 | 第68-83页 |
| ·引物设计 | 第68-69页 |
| ·不同启动子的克隆测序 | 第69-70页 |
| ·不同启动子转录 HA 基因真核表达质粒的构建 | 第70-71页 |
| ·不同 HA 基因真核表达质粒的验证 | 第71-72页 |
| ·kanr基因和 HA 基因共表达载体的构建 | 第72-73页 |
| ·包含 kanr抗性基因和 HA 基因表达盒外源插入片段的扩增 | 第73页 |
| ·HA 表达盒与 GX0101 的重组 | 第73-74页 |
| ·重组菌内 kanr基因表达盒的敲除 | 第74-75页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第75-76页 |
| ·重组病毒的验证 | 第76-77页 |
| ·重组病毒纯度检测 | 第77-79页 |
| ·不同重组病毒体外增殖速率的比较 | 第79页 |
| ·重组病毒感染的 CEF 中 HA 蛋白量的比较 | 第79-80页 |
| ·荧光定量 | 第80-81页 |
| ·重组病毒在体内的复制 | 第81-82页 |
| ·重组病毒诱导产生抗体的检测 | 第82页 |
| ·攻毒保护实验 | 第82-83页 |
| ·重组 MDV 载体上不同位点转录 HA 基因活性的比较 | 第83-91页 |
| ·引物设计 | 第83-84页 |
| ·外源插入片段的扩增以及两侧同源臂的引入 | 第84页 |
| ·载体上不同位点表达 HA 基因的重组病毒的构建 | 第84-86页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第86-87页 |
| ·重组病毒生物学活性的的验证 | 第87页 |
| ·不同重组病毒体外增殖速率的比较 | 第87页 |
| ·重组病毒感染的 CEF 中 HA 蛋白量的比较 | 第87-88页 |
| ·荧光定量 | 第88-89页 |
| ·重组病毒体内复制检测和抗体检测 | 第89-90页 |
| ·攻毒保护实验 | 第90-91页 |
| 3 结果与分析 | 第91-115页 |
| ·抗 H9N2-HA 鼠多价血清的制备及 H9N2-HA 真核表达载体的构建 | 第91-94页 |
| ·HA 基因分两段克隆测序 | 第91页 |
| ·HA 融合蛋白的诱导表达 | 第91-92页 |
| ·抗 H9-HA 鼠多克隆抗体的特异性鉴定 | 第92页 |
| ·H9N2-HA 基因的 RT-PCR 扩增 | 第92-93页 |
| ·HA 真核表达载体在 CEF 细胞上的验证 | 第93-94页 |
| ·一株表达 H9N2-HA 基因的重组 rGX-CMV-HA 的构建 | 第94-97页 |
| ·与 GX0101Δmeq 重组的外源插入表达盒的 PCR 扩增与测序 | 第94-95页 |
| ·两个表达盒与 GX0101Δmeq 之间在 EL250 中的重组 | 第95页 |
| ·敲除抗性筛选基因 kanr | 第95-96页 |
| ·IFA 验证 HA 基因在重组 rGX-CMV-HA 中的表达 | 第96-97页 |
| ·不同启动子在重组病毒中转录 H9N2-HA 活性的比较 | 第97-108页 |
| ·不同启动子的克隆测序 | 第97-98页 |
| ·不同启动子转录 HA 基因真核表达质粒的构建及验证 | 第98-99页 |
| ·kanr基因和 HA 基因共表达载体的构建 | 第99页 |
| ·HA 表达盒与 GX0101Δmeq 的重组 | 第99-100页 |
| ·kanr基因表达盒的敲除 | 第100页 |
| ·重组病毒中 HA 基因的表达 | 第100-102页 |
| ·重组病毒纯度检测 | 第102-103页 |
| ·不同重组病毒体外增殖速率的比较 | 第103页 |
| ·ELISA 方法比较不同重组病毒表达 HA 蛋白的水平 | 第103-104页 |
| ·相对 RT-PCR 荧光定量方法比较不同重组病毒转录 HA-mRNA 的水平 | 第104-105页 |
| ·重组病毒在体内的复制 | 第105-107页 |
| ·抗体检测 | 第107页 |
| ·攻毒免疫保护试验 | 第107-108页 |
| ·GX0101ΔMeq 载体中不同插入位点转录 HA 基因的活性比较 | 第108-115页 |
| ·HA 表达盒与 GX0101ΔMeq 的重组及重组病毒的拯救 | 第108-109页 |
| ·重组病毒的验证 | 第109-110页 |
| ·不同重组病毒体外增殖速率的比较 | 第110-111页 |
| ·ELISA方法比较不同重组病毒表达HA蛋白的水平 | 第111-112页 |
| ·相对RT-PCR荧光定量方法比较不同重组病毒转录HA-mRNA的水平 | 第112页 |
| ·重组病毒在体内的复制 | 第112-113页 |
| ·抗体检测 | 第113-114页 |
| ·攻毒免疫保护试验 | 第114-115页 |
| 4 讨论 | 第115-121页 |
| 5 结论 | 第121-122页 |
| 6 参考文献 | 第122-138页 |
| 7 致谢 | 第138-140页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 | 第140-141页 |
