| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-30页 |
| ·L-苯丙氨酸的概述 | 第17-19页 |
| ·L-苯丙氨酸的性质 | 第17页 |
| ·L-苯丙氨酸的应用及市场 | 第17-18页 |
| ·L-苯丙氨酸的生产技术发展情况 | 第18-19页 |
| ·L-苯丙氨酸工程菌研究概况 | 第19页 |
| ·大肠杆菌中L-苯丙氨酸合成途径及其调节 | 第19-23页 |
| ·中心代谢途径及其调节分析 | 第22页 |
| ·共同途径及其调节分析 | 第22页 |
| ·分支途径及其调节分析 | 第22-23页 |
| ·增强大肠杆菌中L-苯丙氨酸合成的策略 | 第23-28页 |
| ·增加前体物质PEP和E4P的供应 | 第24-26页 |
| ·破除共同途径及分支途径的限速瓶颈 | 第26-27页 |
| ·改造L-苯丙氨酸转运系统 | 第27-28页 |
| ·去除竞争途径,避免碳代谢流分流 | 第28页 |
| ·整体水平优化代谢网络 | 第28页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 L-苯丙氨酸合成中心代谢途径的分子改造 | 第30-47页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料和方法 | 第30-40页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第30页 |
| ·试剂与仪器 | 第30-32页 |
| ·培养基配制 | 第32页 |
| ·基因克隆 | 第32-37页 |
| ·共表达质粒pQST(pQH-ppsA-tktA)的构建 | 第37-39页 |
| ·酶活性检测 | 第39-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-46页 |
| ·pQS及pQT质粒构建流程 | 第40-41页 |
| ·共表达质粒pQST的构建流程 | 第41-43页 |
| ·重组质粒的鉴定结果 | 第43-45页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳结果 | 第45页 |
| ·酶活性测定结果 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 L-苯丙氨酸合成限速步骤的分子改造 | 第47-67页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·材料和方法 | 第47-60页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第47-48页 |
| ·试剂与仪器 | 第48页 |
| ·培养基配制 | 第48页 |
| ·基因克隆 | 第48-52页 |
| ·共表达质粒pQSTE(pQH-ppsA-tktA-pheA~(fbr))的构建 | 第52-54页 |
| ·共表达质粒pQSTER(pQH-ppsA-tktA-pheA~(fbr)-tyrB)的构建 | 第54-57页 |
| ·共表达质粒pQSTERO(pQH-ppsA-tktA-pheA~(fbr)-B-aroG~(fbr))的构建 | 第57-59页 |
| ·酶活性检测 | 第59-60页 |
| ·AroG~(fbr)及PheA~(fbr)抗反馈抑制能力检测 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-65页 |
| ·pQO、pQE及pQR质粒构建流程 | 第60-62页 |
| ·共表达质粒pQSTE、pQSTER及pQSTERO的构建流程 | 第62页 |
| ·重组质粒的鉴定结果 | 第62-63页 |
| ·酶活性测定结果 | 第63-64页 |
| ·AroG~(fbr)及PheA~(fbr)抗反馈抑制能力检测结果 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-67页 |
| 第四章 L-苯丙氨酸转运系统的分子改造及工程菌发酵 | 第67-88页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·材料和方法 | 第67-79页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第67-68页 |
| ·试剂与仪器 | 第68页 |
| ·培养基配制 | 第68-69页 |
| ·NST74菌株aroP基因的敲除 | 第69-74页 |
| ·pQD(pQH-yddG)质粒的构建 | 第74-76页 |
| ·共表达质粒pQSTEROD(pQH-ppsA-tktA-pheA~(fbr)-tyrB-aroG~(fbr)-yddG)的构建 | 第76-78页 |
| ·工程菌的筛选 | 第78页 |
| ·工程菌NST74△P(pQSTEROD)的发酵 | 第78-79页 |
| ·结果与讨论 | 第79-86页 |
| ·aroP基因的敲除流程 | 第79-80页 |
| ·NST74△P敲除菌鉴定结果 | 第80-82页 |
| ·pQD质粒构建流程 | 第82页 |
| ·共表达质粒pQSTEROD的构建流程 | 第82-83页 |
| ·重组质粒的鉴定结果 | 第83-84页 |
| ·工程菌的筛选结果 | 第84-85页 |
| ·工程菌株NST74△P(pQSTEROD)的发酵结果 | 第85-86页 |
| ·本章小结 | 第86-88页 |
| 第五章 高抗反馈抑制能力aroG基因的构建 | 第88-102页 |
| ·引言 | 第88页 |
| ·材料和方法 | 第88-97页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第88-89页 |
| ·试剂与仪器 | 第89-90页 |
| ·培养基配制 | 第90页 |
| ·pwtAG(pMD18T-aroG~(wt))质粒的构建 | 第90-91页 |
| ·aroG~(fbr)单位点突变体的复原 | 第91-92页 |
| ·aroG~(fbr)双位点突变体的构建 | 第92-93页 |
| ·pQG系列质粒的构建 | 第93-94页 |
| ·pQSTERG系列共表达质粒的构建 | 第94-96页 |
| ·AroG~(fbr)突变体表达情况检测 | 第96页 |
| ·突变体酶活性检测 | 第96页 |
| ·突变体抗反馈抑制能力检测 | 第96-97页 |
| ·突变体实际发酵能力检测 | 第97页 |
| ·结果与讨论 | 第97-101页 |
| ·aroG~(fbr)突变体构建流程 | 第97-98页 |
| ·aroG~(fbr)突变体的测序验证及序列分析结果 | 第98页 |
| ·aroG~(fbr)突变体表达情况检测结果 | 第98-99页 |
| ·不同突变体酶活性和抗反馈抑制能力的比较 | 第99-100页 |
| ·不同突变体实际发酵能力的比较 | 第100-101页 |
| ·本章小结 | 第101-102页 |
| 总结 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 攻读博士学位期间发表文章 | 第115页 |
