| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 縮略词表 | 第19-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-47页 |
| ·纤维素的结构 | 第20-21页 |
| ·纤维素的微生物降解 | 第21-24页 |
| ·纤维素降解细菌 | 第21-22页 |
| ·纤维素降解古菌 | 第22-23页 |
| ·纤维素降解真菌 | 第23-24页 |
| ·纤维素降解酶系 | 第24-27页 |
| ·纤维素酶的分类 | 第24-25页 |
| ·纤维素酶系 | 第25-27页 |
| ·瑞氏木霉及其纤维素酶诱导表达调控机制 | 第27-44页 |
| ·瑞氏木霉对不同诱导碳源的响应 | 第28-36页 |
| ·瑞氏木霉纤维素酶基因转录调控 | 第36-39页 |
| ·瑞氏木霉纤维素酶诱导表达过程中的信号传递 | 第39-42页 |
| ·葡萄糖苷酶在纤维素酶诱导表达过程中的作用 | 第42-44页 |
| ·论文立题依据以及主要内容 | 第44-47页 |
| 第二章 瑞氏木霉β-葡萄糖苷酶基因缺失菌株的构建 | 第47-65页 |
| ·材料与方法 | 第47-55页 |
| ·菌株和质粒 | 第47-48页 |
| ·本章实验所用到的引物 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第50页 |
| ·瑞氏木霉原生质体转化 | 第50-51页 |
| ·瑞氏木霉基因组DNA提取 | 第51-52页 |
| ·Southern Blot方法 | 第52-53页 |
| ·基因敲除质粒构建 | 第53-54页 |
| ·β-葡萄糖苷酶酶活测定 | 第54页 |
| ·瑞氏木霉全细胞提取液制备 | 第54-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-64页 |
| ·Δcel1a菌株构建 | 第55-57页 |
| ·Δcel1b菌株的构建 | 第57-59页 |
| ·Δcel1aΔcel1b菌株的构建 | 第59-60页 |
| ·ΔtriβG 菌株的构建 | 第60-62页 |
| ·胞内β-葡萄糖苷酶酶活分析 | 第62-63页 |
| ·胞外β-葡萄糖苷酶酶活分析 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第三章 瑞氏木霉主要β-葡萄糖苷酶在纤维素诱导纤维素酶基因表达过程中的作用研究 | 第65-79页 |
| ·材料与方法 | 第65-70页 |
| ·菌种与质粒 | 第65-66页 |
| ·本章实验用到的引物 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66-67页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第67页 |
| ·瑞氏木霉培养条件 | 第67页 |
| ·瑞氏木霉生长测定 | 第67-68页 |
| ·纤维素外切酶酶活测定 | 第68页 |
| ·瑞氏木霉总RNA提取(Trizol法) | 第68页 |
| ·Northern Blot(罗氏DIG Northern Starter Kit) | 第68-70页 |
| ·qRT-PCR | 第70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-77页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因缺失菌株生长表型分析 | 第70-72页 |
| ·β-葡萄糖苷酶缺失影响纤维素酶表达 | 第72-73页 |
| ·Cel1a和Cel1b的缺失影响纤维素酶基因的快速诱导表达 | 第73-75页 |
| ·Cel1a和Cel1b的缺失影响休止系统中纤维素酶基因的表达 | 第75-76页 |
| ·Cel1a和Cel1b缺失不影响槐糖对纤维素酶基因的诱导 | 第76页 |
| ·Bgl1/Cel3a的缺失进一步影响纤维素酶基因的诱导表达 | 第76-77页 |
| ·小结 | 第77-79页 |
| 第四章 瑞氏木霉β-葡萄糖苷酶在纤维二糖诱导纤维素酶基因表达过程中的作用研究 | 第79-94页 |
| ·材料与方法 | 第79-86页 |
| ·菌种与质粒 | 第79-80页 |
| ·本章实验所用到的引物 | 第80页 |
| ·培养基 | 第80页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第80-81页 |
| ·SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第81-82页 |
| ·凝胶染色(考马斯亮蓝法) | 第82页 |
| ·Western blot | 第82-84页 |
| ·发酵液Avicelase酶活测定 | 第84页 |
| ·DNS法测定还原糖含量 | 第84-85页 |
| ·ImageJ定量方法 | 第85页 |
| ·RNA提取 | 第85页 |
| ·定量PCR | 第85-86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-92页 |
| ·纤维二糖诱导纤维素酶基因表达条件的建立 | 第86-87页 |
| ·β-葡萄糖苷酶缺失对纤维二糖诱导纤维素酶基因表达的影响 | 第87-89页 |
| ·β-葡萄糖苷酶对纤维二糖诱导的影响发生在转录层面 | 第89-90页 |
| ·添加纤维二糖恢复β-葡萄糖苷酶缺失菌对纤维素的诱导响应 | 第90-91页 |
| ·β-葡萄糖苷酶影响纤维素酶表达的模式 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-94页 |
| 第五章 瑞氏木霉β-葡萄糖苷酶在乳糖诱导纤维素酶基因表达过程中的作用研究 | 第94-112页 |
| ·材料与方法 | 第94-100页 |
| ·菌种与质粒 | 第94-95页 |
| ·本章实验所用到的引物 | 第95-96页 |
| ·培养基 | 第96页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第96页 |
| ·瑞氏木霉核蛋白提取 | 第96-97页 |
| ·凝胶迁移实验(EMSA) | 第97-100页 |
| ·质粒构建 | 第100页 |
| ·真菌转化 | 第100页 |
| ·结果与讨论 | 第100-110页 |
| ·β-葡萄糖苷酶缺失影响菌体对乳糖的利用 | 第100-101页 |
| ·β-葡萄糖苷酶缺失影响乳糖诱导纤维素酶基因的表达 | 第101-102页 |
| ·Cel1a与Cel1b在乳糖诱导过程中的作用关系分析 | 第102-107页 |
| ·β-葡萄糖苷酶缺失影响Xyr1的转录 | 第107页 |
| ·组成型表达Xyr1不能恢复β-葡萄糖苷酶基因缺失菌株纤维素酶表达 | 第107-109页 |
| ·β-葡萄糖苷酶缺失影响cbh1启动子复合物的形成 | 第109-110页 |
| ·小结 | 第110-112页 |
| 第六章 瑞氏木霉β-葡萄糖苷酶乳糖水解活性及其在乳糖诱导纤维素酶基因表达过程中作用的研究 | 第112-130页 |
| ·材料与方法 | 第112-118页 |
| ·菌种与质粒 | 第112-113页 |
| ·本章实验所用到的引物 | 第113-114页 |
| ·培养基以及培养方式 | 第114页 |
| ·主要试剂 | 第114-115页 |
| ·异源表达 | 第115页 |
| ·His标签蛋白纯化 | 第115-116页 |
| ·ONPG酶活测定 | 第116页 |
| ·乳糖水解活性测定 | 第116页 |
| ·高效液相色谱(HPLC) | 第116-117页 |
| ·质粒构建 | 第117-118页 |
| ·结果与讨论 | 第118-129页 |
| ·Cel1a和Cel1b异源表达质粒构建 | 第118-119页 |
| ·Cel1a和Cel1b的异源表达和纯化 | 第119-121页 |
| ·Cel1a和Cel1b底物特异性分析 | 第121-123页 |
| ·β-葡萄糖苷酶糖苷水解活性对纤维素酶基因表达的影响 | 第123-127页 |
| ·β-葡萄糖苷酶胞外乳糖水解液对纤维素酶基因诱导作用分析 | 第127-128页 |
| ·乳糖诱导过程中β-葡萄糖苷酶作用模式图 | 第128-129页 |
| ·小结 | 第129-130页 |
| 全文总结与展望 | 第130-133页 |
| 参考文献 | 第133-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第141-142页 |
| 外文写作 | 第142-185页 |
| 附表 | 第185页 |
