| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 目录 | 第13-18页 |
| 缩略词表 | 第18-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-46页 |
| ·引言 | 第20-21页 |
| ·棉纤维发育的过程 | 第21-24页 |
| ·纤维起始期 | 第21-22页 |
| ·棉纤维原始细胞的分化 | 第21-22页 |
| ·棉纤维的突起 | 第22页 |
| ·棉纤维的伸长 | 第22-23页 |
| ·纤维细胞的伸长 | 第22-23页 |
| ·初生壁的合成 | 第23页 |
| ·棉纤维的次生壁增厚 | 第23-24页 |
| ·纤维素合成酶 | 第23-24页 |
| ·蔗糖合成酶 | 第24页 |
| ·棉纤维的成熟 | 第24页 |
| ·MYB 转录因子家族在表皮发育中的作用 | 第24-31页 |
| ·与拟南芥表皮细胞分化和发育相关的 MYB 转录因子 | 第25-29页 |
| ·与叶表皮毛形态建成相关 MYB 转录因子 | 第25-27页 |
| ·与叶表皮毛分叉相关 MYB 转录因子 | 第27-28页 |
| ·与种皮细胞发育的相关 MYB 转录因子 | 第28-29页 |
| ·与棉纤维发育相关的 MYB 转录因子 | 第29-31页 |
| ·HD-Zip IV 家族在表皮发育中的作用 | 第31-35页 |
| ·拟南芥中与表皮相关的 HD-Zip IV 转录因子 | 第32-35页 |
| ·棉花中与纤维发育相关的 HD-Zip IV 转录因子 | 第35页 |
| ·SANT/MYB 类转录因子在发育中的作用 | 第35-37页 |
| ·BR 在早期纤维发育中的作用及 NAC 转录因子的功能研究 | 第37-44页 |
| ·BR 在纤维发育中的作用 | 第37页 |
| ·NAC 转录因子在发育中的功能 | 第37-42页 |
| ·茎端分生组织发育相关的 NAC 转录因子 | 第38-40页 |
| ·与维管组织发育相关的 NAC 转录因子 | 第40-41页 |
| ·VND 亚家族 | 第41页 |
| ·NST 亚家族 | 第41-42页 |
| ·VND 基因和 NST 基因的共同靶标基因 | 第42页 |
| ·与 BR 相关的 NAC 转录因子 | 第42-44页 |
| ·本研究的目的及实验技术路线 | 第44-46页 |
| 第二章 GBML1 的克隆和功能研究 | 第46-98页 |
| ·引言 | 第46-47页 |
| ·材料和方法 | 第47-70页 |
| ·实验材料 | 第47-50页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·菌株和质粒 | 第47-48页 |
| ·酶，试剂盒和引物 | 第48页 |
| ·试剂的配制 | 第48-50页 |
| ·实验方法 | 第50-70页 |
| ·GbML1，GbMYB25，GbMYB2 等基因的克隆 | 第50-54页 |
| ·海岛棉 RNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·海岛棉 5’及 3’ -RACE cDNA 文库的构建 | 第51-52页 |
| ·海岛棉 GbML1 全长 cDNA 的获得 | 第52-53页 |
| ·海岛棉 GbMYB25 和 GbMYB2 基因的克隆 | 第53页 |
| ·海岛棉基因组 DNA 的提取 | 第53页 |
| ·海岛棉 GbML1 基因组 DNA 的克隆 | 第53-54页 |
| ·GbML1 启动子的克隆 | 第54-56页 |
| ·棉花基因组步移文库的构建 | 第54-55页 |
| ·巢式 PCR 扩增未知片段 | 第55-56页 |
| ·GbML1 的生物信息学分析 | 第56页 |
| ·GbML1 结合 L1 盒的凝胶阻滞实验 | 第56-60页 |
| ·蛋白原核表达和纯化 | 第56-57页 |
| ·Bradford 法测定蛋白含量 | 第57-58页 |
| ·探针合成和标记 | 第58页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第58-60页 |
| ·GbML1 和 GbMYB25 的表达分析 | 第60-61页 |
| ·cDNA 样品准备 | 第60-61页 |
| ·海岛棉不同组织 RT-PCR 分析 | 第61页 |
| ·GbML1 和 GbMYB25 的亚细胞定位 | 第61-64页 |
| ·pA7 -CFP-GbML1 和 pA7-GbMYB25-YFP 载体的构建 | 第61页 |
| ·无内毒素质粒的抽提 | 第61-62页 |
| ·基因枪轰击洋葱表皮细胞 | 第62-64页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察荧光信号 | 第64页 |
| ·GbML1，GbMYB25 和 GbMYB2 的自激活实验 | 第64-65页 |
| ·载体构建 | 第64页 |
| ·酵母转化方法 | 第64-65页 |
| ·激活能力的评价 | 第65页 |
| ·GbML1 和 GbMYB25 的酵母双杂交实验 | 第65-66页 |
| ·载体构建 | 第65页 |
| ·酵母转化 | 第65-66页 |
| ·GbML1 和 GbMYB25 的体外 pull-down 实验 | 第66-68页 |
| ·蛋白表达和固定 | 第66页 |
| ·蛋白孵育 | 第66-67页 |
| ·Western 检测 | 第67-68页 |
| ·GbML1 在拟南芥中的过量表达 | 第68-70页 |
| ·pHB-GbML1 载体的构建 | 第68页 |
| ·农杆菌的转化 | 第68-69页 |
| ·拟南芥的转化 | 第69页 |
| ·拟南芥阳性植株的筛选 | 第69-70页 |
| ·拟南芥 DNA 的简单提取 | 第70页 |
| ·拟南芥 RNA 的提取 | 第70页 |
| ·阳性转基因植株的验证及 RT-PCR 分析转基因植株中基因的表达情况 | 第70页 |
| ·结果和讨论 | 第70-98页 |
| ·GbML1 基因的序列特征 | 第70-72页 |
| ·GbML1 是一个模块化的 HD-Zip IV 转录因子 | 第72-75页 |
| ·GbMYB25 和 GbMYB2 分别是 GhMYB25 和 GaMYB2 的同源基因 | 第75页 |
| ·GbML1 与 GbMYB25 可共同定位于细胞核 | 第75-78页 |
| ·GbML1 为弱激活子而 GbMYB25 为强激活子 | 第78-81页 |
| ·GbML1 启动子克隆和分析 | 第81-83页 |
| ·GbML1 的蛋白表达 | 第83页 |
| ·GbML1 的 HD- ZLZ 结构域特异性地结合 L1 盒 | 第83-87页 |
| ·GbML1 和 GbMYB25 在发育的胚珠和纤维中强表达 | 第87页 |
| ·GbML1 的 START-SAD 结构域结合 GbMYB25 的 C 端 | 第87-93页 |
| ·GbML1 在拟南芥中过量表达促进了表皮毛的生长 | 第93-95页 |
| ·小结和讨论 | 第95-98页 |
| 第三章 海岛棉中两个 SANT/MYB 类转录因子的克隆和功能分析 | 第98-126页 |
| ·引言 | 第98-99页 |
| ·材料和方法 | 第99-106页 |
| ·实验材料 | 第99-100页 |
| ·实验方法 | 第100-106页 |
| ·GbRL1 和 GbRL2 基因的克隆 | 第100页 |
| ·全长 cDNA 的获得 | 第100页 |
| ·GbRL1/GbRL2 的基因组 DNA 的获得 | 第100页 |
| ·GbRL1 和 GbRL2 的启动子克隆 | 第100页 |
| ·GbRL1 和 GbRL2 的生物信息学预测 | 第100页 |
| ·Southern blot | 第100-104页 |
| ·基因组酶切和电泳 | 第101页 |
| ·转膜，固定 | 第101-102页 |
| ·探针制备 | 第102页 |
| ·杂交 | 第102-103页 |
| ·洗膜 | 第103页 |
| ·检测 | 第103-104页 |
| ·GbRL1 和 GbRL2 的 RT-PCR 分析 | 第104页 |
| ·Real-time PCR 分析 | 第104-105页 |
| ·cDNA 样品准备 | 第104-105页 |
| ·标准曲线绘制 | 第105页 |
| ·GbRL1 和 GbRL2 的转基因研究 | 第105-106页 |
| ·载体构建 | 第105-106页 |
| ·转化拟南芥 | 第106页 |
| ·实验结果和讨论 | 第106-126页 |
| ·GbRL1 基因的克隆和功能分析 | 第106-116页 |
| ·GbRL1 基因的分离和鉴定 | 第106-108页 |
| ·GbRL1 蛋白的序列分析 | 第108-110页 |
| ·GbRL1 的表达模式 | 第110-112页 |
| ·GbRL1 的启动子克隆和分析 | 第112-113页 |
| ·过量表达 GbRL1 的发育表型 | 第113-114页 |
| ·小结和讨论 | 第114-116页 |
| ·GbRL2 基因的克隆和分析 | 第116-126页 |
| ·GbRL2 的克隆 | 第116页 |
| ·GbRL2 基因的序列特征 | 第116-118页 |
| ·GbRL2 的进化分析 | 第118-120页 |
| ·GbRL2 的表达分析 | 第120-121页 |
| ·GbRL2 启动子的克隆和分析 | 第121-124页 |
| ·GbRL2 转基因载体的构建 | 第124页 |
| ·小结和讨论 | 第124-126页 |
| 第四章 NAC 转录因子 SRN1 的功能研究 | 第126-162页 |
| ·引言 | 第126-127页 |
| ·材料和方法 | 第127-133页 |
| ·实验材料 | 第127-128页 |
| ·植物材料 | 第127页 |
| ·菌株和质粒 | 第127页 |
| ·酶、试剂盒和引物 | 第127页 |
| ·试剂的配制 | 第127-128页 |
| ·实验方法 | 第128-133页 |
| ·SRN1 的生物信息学分析 | 第128页 |
| ·SRN1 的表达分析 | 第128-129页 |
| ·果荚 RNA 的提取 | 第128-129页 |
| ·RT-PCR 检测 SRN1 的组织特异性表达 | 第129页 |
| ·SRN1 的启动子活性分析 | 第129页 |
| ·pSRN1::GUS 载体的构建 | 第129页 |
| ·转基因植株的获得 | 第129页 |
| ·GUS 染色 | 第129页 |
| ·SRN1 蛋白的表达 | 第129页 |
| ·SRN1 蛋白结合 DNA 实验 | 第129页 |
| ·SRN1 蛋白的自激活实验 | 第129-130页 |
| ·SRN1 蛋白的亚细胞定位 | 第130页 |
| ·植物表达载体构建 | 第130页 |
| ·转基因植株的获得及 YFP 观察 | 第130页 |
| ·srn 突变体的鉴定 | 第130页 |
| ·SRN1 的 RNAi 实验 | 第130-131页 |
| ·RNA 干扰载体的构建 | 第130-131页 |
| ·植物转基因及筛选 | 第131页 |
| ·人工 miRNA 干扰 SRN1 表达实验 | 第131-132页 |
| ·人工 miRNA 载体构建 | 第131-132页 |
| ·植物转基因及筛选 | 第132页 |
| ·过量表达 SRN1139 | 第132页 |
| ·过量表达 SRN1 的载体构建 | 第132页 |
| ·植物转基因及筛选 | 第132页 |
| ·扫描电镜观察 | 第132页 |
| ·转基因种子的相差显微镜观察 | 第132-133页 |
| ·结果和讨论 | 第133-162页 |
| ·SRN1 基因的生物信息学分析 | 第133-135页 |
| ·SRN1 的基因结构 | 第133页 |
| ·SRN1 的进化树分析 | 第133-135页 |
| ·SRN1 基因的表达模式研究 | 第135-139页 |
| ·RT-PCR 分析 | 第135页 |
| ·启动子活性分析 | 第135-139页 |
| ·SRN1 结合的顺式作用元件 | 第139-140页 |
| ·SRN1 蛋白的 C 端具有转录激活功能 | 第140-141页 |
| ·SRN1 蛋白可以形成同二聚体 | 第141页 |
| ·SRN1 的亚细胞定位 | 第141-142页 |
| ·srn1 突变体 | 第142-143页 |
| ·RNA 干扰降低 SRN1 表达的表型 | 第143-145页 |
| ·人工 miRNA 降低 SRN1 表达的表型 | 第145-146页 |
| ·过量表达 SRN1 的表型 | 第146-151页 |
| ·过量表达 SRN1 造成了严重的发育表型 | 第146-147页 |
| ·过量表达 SRN1 对各个生长时期不同组织器官发育的影响 | 第147-149页 |
| ·过量表达 SRN1 对于种子发育的影响 | 第149-151页 |
| ·过量表达 SRN1-YFP 的新表型 | 第151-154页 |
| ·SRN1-OE IV 植株的表型 | 第151-153页 |
| ·SRN1-OE IV 种子的发育 | 第153-154页 |
| ·SRN1 过量表达增加了生长素的合成 | 第154-156页 |
| ·SRN1 基因调控纤维素合成酶基因和表皮发育相关基因的表达 | 第156-157页 |
| ·SRN1 蛋白受到修饰加工 | 第157-159页 |
| ·小结和讨论 | 第159-162页 |
| 第五章 总结和展望 | 第162-166页 |
| ·研究总结 | 第162-164页 |
| ·创新点 | 第164页 |
| ·后续工作展望 | 第164-166页 |
| 参考文献 | 第166-182页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第182-184页 |
| 致谢 | 第184-186页 |
| 附录 | 第186-194页 |
