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甘蓝型油菜自交不亲和保持机理及AtPUB2在自交不亲和反应中功能研究

目录第1-8页
摘要第8-10页
Abstract第10-12页
縮略语表第12-13页
前言第13-30页
 1 自交不亲和概况第13-16页
   ·自交不亲和性的分布第13-14页
   ·自交不亲和性分类第14-15页
   ·十字花科自交不亲和性的细胞学反应第15-16页
 2 十字花科自交不亲和性受孢子体型S位点复等位基因控制第16页
 3 S位点分子生物学研究第16-21页
   ·首个S位点基因SLG的发现第16-17页
   ·自交不亲和特异性识别反应柱头决定因子SRK的发现第17-18页
   ·自交不亲和特异性识别反应花粉决定因子SCR/SP11的发现第18-19页
   ·S haplotypes结构和多态性第19-20页
   ·S haplotypes间显隐性关系第20-21页
 4 芸薹属自交不亲和反应信号传导第21-24页
   ·SRK激活细胞信号传导通路拒绝自身花粉第21页
   ·MLPK与SRK相互作用促进SI第21-22页
   ·与SRK激酶结构域互作的蛋白第22页
   ·THL可抑制SRK活性第22-23页
   ·ARC1作为SRK下游反应底物促进SI第23页
   ·Exo70A1作为ARC1的作用底物参与亲和反应第23-24页
 5 自交不亲和性与杂种优势利用第24-29页
   ·自交不亲和性的应用第24页
   ·甘蓝型油菜自交不亲和系的选育第24-25页
     ·自交分离筛选第24-25页
     ·种间杂交选育第25页
     ·人工合成自交不亲和系第25页
   ·自交不亲和系的繁殖第25-27页
     ·剥蕾授粉第26页
     ·喷施盐水第26页
     ·CO_2处理第26-27页
     ·利用保持系繁殖自交不亲和系第27页
   ·利用油菜自交不亲和系配制杂种的途径第27-29页
     ·单交杂种第27-28页
     ·三系杂种第28页
     ·双交杂种第28-29页
     ·两系杂种第29页
 6 未来工作展望第29-30页
第一章 甘蓝型油菜自交不亲和保持性研究第30-52页
 1 研究背景第30-31页
 2 材料与方法第31-37页
   ·实验材料第31页
   ·实验方法第31-37页
     ·亲和性的鉴定第31页
     ·引物合成与测序第31-32页
     ·DNA的提取第32页
     ·PCR扩增第32-33页
     ·扩增片段回收第33页
     ·E. coli感受态细胞制备第33-34页
     ·TA克隆转化及筛选第34页
     ·油菜花蕾总RNA的抽提及检测第34-35页
     ·cDNA第一条链合成第35页
     ·半定量基因表达分析第35-36页
     ·遗传分析第36-37页
 3 结果与分析第37-48页
   ·甘蓝型油菜自交不亲和系S-1300核心保持系的鉴定第37-39页
   ·核心保持系S单倍型鉴定第39-41页
   ·保持系中分子标记的开发与利用第41-42页
   ·保持系Bing409遗传分析第42-43页
   ·保持系89008遗传分析第43-44页
   ·保持系中S位点基因表达分析第44-46页
   ·保持性机理分析第46-48页
 4 讨论第48-52页
   ·甘蓝型油菜自交不亲和保持系第48-49页
   ·芸薹属中S单倍型的显隐性关系第49-50页
   ·甘蓝型油菜自交不亲和机理研究与应用第50-52页
第二章 AtPUB2在自交不亲和反应中功能研究第52-81页
 1 研究背景第52-53页
 2 材料与方法第53-60页
   ·实验材料第53页
   ·实验方法第53-60页
     ·拟南芥Plant U-box蛋白的生物信息学分析第53页
     ·突变体幼苗筛选第53-54页
     ·F_2代分离群体基因型分析第54页
     ·基因表达分析第54页
     ·GUS表达载体构建第54-55页
     ·拟南芥的遗传转化与阳性苗筛选第55-56页
     ·Southern杂交第56-57页
     ·授粉测验第57-58页
     ·酵母双杂交第58页
     ·GUS染色分析第58-59页
     ·病原菌抗病性检测第59-60页
 3 结果与分析第60-75页
   ·拟南芥中Plant U-box蛋白的生物信息学分析第60-65页
     ·拟南芥中AtPUBs蛋白第60-62页
     ·柱头中表达的AtPUBs基因第62-63页
     ·AtPUBs蛋白与BnARC1蛋白的亲缘关系分析第63-64页
     ·AtPUBs蛋白的二级结构预测分析第64页
     ·AtPUB2的表达模式预测第64-65页
   ·AtPUB2对自交不亲和反应的影响第65-68页
     ·T-DNA插入突变体鉴定与分析第65-67页
     ·AtPUB2与自交不亲和反应第67-68页
     ·AtPUB2与花粉管的生长第68页
   ·AtPUB2与SRK间相互作用分析第68-70页
     ·基因克隆与酵母表达载体鉴定第69页
     ·相互作用鉴定第69-70页
   ·AtPUB2的表达分析第70-73页
     ·AtPUB2启动子克隆及融合GUS表达载体构建第70-71页
     ·AtPUB2pr::uidA单拷贝阳性苗筛选第71页
     ·AtPUB2表达分析第71-73页
   ·病原菌抗病性检测第73-75页
 4 讨论第75-81页
   ·AtPUB2不参与拟南芥中自交不亲和反应第75-76页
   ·AtPUB2功能分析第76-77页
   ·自交不亲和反应可能存在多条信号传导通路第77-78页
   ·自交不亲和反应相关基因的分离与鉴定第78-81页
     ·利用激活标签分离和鉴定自交不亲和反应相关基因第78-79页
     ·利用全基因组关联分析发掘和鉴定自交不亲和反应相关基因第79-81页
参考文献第81-95页
附录1 第一章研究中所用引物第95-96页
附录2 第二章研究中所用引物第96-97页
附录3 作者简介和在读期间发表的论文第97-99页
致谢第99页

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