| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-37页 |
| 1 猪肺炎支原体生物学特征 | 第13-15页 |
| ·形态特征 | 第13-14页 |
| ·培养特性 | 第14页 |
| ·遗传学特征 | 第14-15页 |
| 2 猪肺炎支原体致病机理 | 第15-16页 |
| 3 猪肺炎支原体流行病学特点 | 第16页 |
| 4 猪肺炎支原体主要蛋白研究进展 | 第16-24页 |
| ·黏附因子 | 第16-19页 |
| ·膜蛋白 | 第19-21页 |
| ·热休克蛋白 | 第21-23页 |
| ·细胞质蛋白P36 | 第23-24页 |
| 5 猪支原体肺炎诊断方法的研究进展 | 第24-30页 |
| ·病原的分离培养 | 第24页 |
| ·血清学抗体检测技术 | 第24-26页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第26-30页 |
| 参考文献 | 第30-37页 |
| 第二篇 研究内容 | 第37-81页 |
| 第一章 猪肺炎支原体P65基因的克隆表达及鉴定 | 第37-53页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| ·质粒和菌株 | 第37页 |
| ·主要材料与试剂 | 第37-38页 |
| ·试验仪器 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-47页 |
| ·引物的设计与合成 | 第38页 |
| ·模板的制备 | 第38页 |
| ·Mhp/P65基因的PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·Mhp/P65基因的回收纯化 | 第39-40页 |
| ·Mhp/P65基因与pMD18-T载体的连接 | 第40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40-41页 |
| ·重组质粒DNA的提取、鉴定及测序 | 第41-42页 |
| ·Mhp/P65基因的SOE-PCR突变连接 | 第42页 |
| ·原核表达载体pET-32a(+)/P65的构建 | 第42-43页 |
| ·连接产物的转化、重组质粒DNA的提取及鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的诱导时间的优化及存在形式 | 第45页 |
| ·蛋白的纯化 | 第45页 |
| ·表达产物的Westem-blot检测 | 第45-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-50页 |
| ·基因获得示意图 | 第47页 |
| ·猪肺炎支原体P65基因的扩增 | 第47-48页 |
| ·Mhp/P65基因的克隆测序 | 第48页 |
| ·Mhp/P65基因的SOE-PCR突变 | 第48-49页 |
| ·pET-32a(+)/P65重组质粒的构建与鉴定 | 第49页 |
| ·重组蛋白的表达及存在形式 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的纯化及Westem-blot鉴定 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 5 小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-53页 |
| 第二章 P65蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第53-65页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| ·实验动物、菌株和细胞系 | 第53页 |
| ·主要材料与试剂 | 第53页 |
| ·试验仪器 | 第53-54页 |
| 2 方法 | 第54-59页 |
| ·小鼠的免疫 | 第54页 |
| ·筛选抗原Mhp 168株F350代全菌蛋白的制备 | 第54页 |
| ·P65单抗筛选方法的建立 | 第54-55页 |
| ·sp2/0骨髓瘤细胞的准备 | 第55页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第55页 |
| ·脾细胞的制备 | 第55-56页 |
| ·细胞融合 | 第56页 |
| ·P65杂交瘤细胞株的建立 | 第56-57页 |
| ·腹水的制备 | 第57页 |
| ·P65单克隆抗体的鉴定 | 第57-58页 |
| ·P65单抗腹水的纯化及检测 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-62页 |
| ·间接ELISA法检测免疫后小鼠效价 | 第59页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第59页 |
| ·P65单克隆抗体的鉴定 | 第59-61页 |
| ·P65单克隆抗体的纯化检测 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62页 |
| 5 小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 第三章 猪肺炎支原体P65蛋白单克隆抗体阻断ELISA方法的建立及初步应用 | 第65-81页 |
| 1 材料 | 第65-66页 |
| ·蛋白、血清样本、单抗 | 第65页 |
| ·主要材料与试剂 | 第65页 |
| ·试验仪器 | 第65-66页 |
| 2 方法 | 第66-69页 |
| ·抗原蛋白的制备 | 第66页 |
| ·纯化单克隆抗体的辣根过氧化酶(HRP)标记 | 第66页 |
| ·辣根过氧化酶(HRP)标记单克隆抗体的效价检测 | 第66页 |
| ·阻断ELISA基本条件 | 第66-67页 |
| ·单抗阻断ELISA方法的建立 | 第67-69页 |
| ·阻断ELISA临界值的确定 | 第69页 |
| ·重复性试验 | 第69页 |
| ·交叉反应试验 | 第69页 |
| ·临床血清样品的检测 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-77页 |
| ·辣根过氧化酶(HRP)标记单克隆抗体的效价检测 | 第69页 |
| ·单抗阻断ELISA方法的建立 | 第69-74页 |
| ·阻断ELISA临界值的确定 | 第74-75页 |
| ·重复性试验 | 第75-76页 |
| ·交叉反应试验 | 第76页 |
| ·临床样本检测 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-78页 |
| 5 小结 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-81页 |
| 全文总结 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 缩略语及符号 | 第85-87页 |
| 附录 | 第87-90页 |
