| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1 基因沉默(RNAi)简介 | 第12-21页 |
| ·RNAi的发现与发展 | 第12-13页 |
| ·RNAi的作用机制及特点 | 第13-15页 |
| ·RNAi的分类 | 第15-17页 |
| ·RNAi在昆虫学上应用 | 第17-18页 |
| ·植物传递的RNAi效应与害虫治理 | 第18-20页 |
| ·dsRNA的吸收机制 | 第20-21页 |
| 2 幼虫巨大致死基因(Lethal giant larvae(Lgl)) | 第21-22页 |
| 3 内吞作用(Endocytosis) | 第22-29页 |
| ·内吞作用的机制 | 第22页 |
| ·内吞作用的分类 | 第22-23页 |
| ·网格蛋白介导的内吞作用(Clathrin-mediated endocytosis) | 第23-29页 |
| 4 本论文的研究意义 | 第29-30页 |
| 第二章 赤拟谷盗幼虫巨大致死基因(Lgl)的分子特性 | 第30-40页 |
| 1 材料与方法 | 第30-35页 |
| ·供试虫源及饲养 | 第30页 |
| ·试剂与试剂盒 | 第30页 |
| ·试剂的配制 | 第30-31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增、产物回收纯化、连接及转化 | 第32-34页 |
| ·克隆PCR和质粒提取 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-38页 |
| ·总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·扩增目的条带 | 第36页 |
| ·赤拟谷盗TcLgl的cDNA序列及推导的蛋白序列 | 第36页 |
| ·赤拟谷盗TcLgl的基因组结构 | 第36-37页 |
| ·几种昆虫Lgl的氨基酸序列比对 | 第37页 |
| ·昆虫Lgl的遗传发育树分析 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 赤拟谷盗Lgl基因的表达量分析 | 第40-45页 |
| 1 材料与方法 | 第40-41页 |
| ·供试虫源及饲养 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第40页 |
| ·荧光定量PCR引物设计 | 第40-41页 |
| ·不同发育时期、不同组织TcLgl基因表达量测定(RT-qPCR) | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-43页 |
| ·不同发育时期、不同组织TcLgl的相对表达量 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 赤拟谷盗Lgl基因的功能研究 | 第45-55页 |
| 1 材料与方法 | 第45-50页 |
| ·供试虫源及饲养 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·含T7启动子的模板DNA制备 | 第45-47页 |
| ·dsRNA的制备 | 第47-49页 |
| ·显微注射及实验设计 | 第49页 |
| ·mRNA水平检测沉默效率 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·dsRNA的合成 | 第50页 |
| ·dsRNA介导的TcLgl沉默对早期幼虫存活率的影响 | 第50-51页 |
| ·dsRNA介导的TcLgl沉默对末龄幼虫化蛹率的影响 | 第51-52页 |
| ·dsRNA介导的TcLgl沉默对早期蛹羽化率的影响 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 赤拟谷盗内吞作用相关基因的分子特性 | 第55-66页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·供试虫源及饲养 | 第55页 |
| ·试剂与试剂盒 | 第55页 |
| ·试剂的配制 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·引物设计 | 第55页 |
| ·总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第55-56页 |
| ·PCR扩增、产物回收纯化、连接及转化 | 第56页 |
| ·克隆PCR和质粒提取 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-65页 |
| ·赤拟谷盗网格蛋白重链基因(TcChc) | 第57-59页 |
| ·赤拟谷盗衔接蛋白基因(TcAP50) | 第59-61页 |
| ·赤拟谷盗V型ATP酶亚基H基因(TcVhaSFD) | 第61-63页 |
| ·赤拟谷盗Rab7 | 第63-65页 |
| 3 讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 赤拟谷盗内吞作用相关基因表达量分析 | 第66-75页 |
| 1 材料与方法 | 第66页 |
| ·供试虫源及饲养 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第66页 |
| ·荧光定量PCR引物设计 | 第66页 |
| ·不同发育时期、不同组织内吞作用相关基因表达量测定(RT-qPCR) | 第66页 |
| 2 结果 | 第66-74页 |
| ·不同发育时期、不同组织TcChc基因相对表达量 | 第66-68页 |
| ·不同发育时期、不同组织TcAP50基因相对表达量 | 第68-70页 |
| ·不同发育时期、不同组织TcVhaSFD基因相对表达量 | 第70-72页 |
| ·不同发育时期、不同组织TcRab7基因表达量 | 第72-74页 |
| 3 讨论 | 第74-75页 |
| 第七章 赤拟谷盗内吞作用相关基因的功能研究 | 第75-89页 |
| 1 材料与方法 | 第75-77页 |
| ·供试虫源及饲养 | 第75页 |
| ·主要仪器 | 第75页 |
| ·主要试剂 | 第75页 |
| ·含T7启动子的模板DNA制备 | 第75-76页 |
| ·dsRNA的制备 | 第76页 |
| ·显微注射及实验设计 | 第76页 |
| ·mRNA水平检测沉默效率 | 第76页 |
| ·赤拟谷盗卵巢组织的解剖与染色 | 第76-77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-87页 |
| ·赤拟谷盗网格蛋白重链基因的功能 | 第77-80页 |
| ·赤拟谷盗AP50基因的功能 | 第80-82页 |
| ·赤拟谷盗VhaSFD基因的功能 | 第82-85页 |
| ·赤拟谷盗Rab7基因的功能 | 第85-87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 第八章 赤拟谷盗dsRNA吸收机制的药理学研究 | 第89-96页 |
| 1 材料与方法 | 第89-90页 |
| ·供试虫源及饲养 | 第89页 |
| ·主要试剂 | 第89页 |
| ·主要仪器 | 第89页 |
| ·总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第89页 |
| ·荧光定量PCR引物设计 | 第89-90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-94页 |
| ·氯丙嗪(Chlorpromazine) | 第90-91页 |
| ·甲基-β-环糊精(Methyl-β-cyclodextrin) | 第91-92页 |
| ·巴佛洛霉素A(Bafilomycin A1) | 第92-93页 |
| ·细胞松弛素D(Cytochalasin D) | 第93-94页 |
| 3 讨论 | 第94-96页 |
| 第九章 赤拟谷盗dsRNA吸收机制的荧光定位分析 | 第96-100页 |
| 1 材料与方法 | 第96-98页 |
| ·供试虫源及饲养 | 第96页 |
| ·主要仪器 | 第96页 |
| ·主要试剂 | 第96页 |
| ·Cy3标记dsRNA制备 | 第96-97页 |
| ·赤拟谷盗中肠组织切片制作 | 第97-98页 |
| 2 结果与分析 | 第98-99页 |
| ·Cy3标记dsRNA的合成 | 第98页 |
| ·赤拟谷盗中肠组织切片 | 第98-99页 |
| 3 讨论 | 第99-100页 |
| 第十章 赤拟谷盗dsRNA吸收的分子机制 | 第100-106页 |
| 1 材料与方法 | 第100-101页 |
| ·供试虫源及饲养 | 第100页 |
| ·主要仪器 | 第100页 |
| ·主要试剂 | 第100页 |
| ·含T7启动子的模板DNA制备 | 第100页 |
| ·dsRNA的制备 | 第100-101页 |
| ·显微注射及实验设计 | 第101页 |
| ·mRNA水平检测沉默效率 | 第101页 |
| 2 结果与分析 | 第101-104页 |
| ·不同长度dsRNA的合成 | 第101页 |
| ·不同长度dsRNA对靶标基因沉默效率的影响 | 第101-102页 |
| ·网格蛋白介导的内吞作用对靶标基因沉默效率的影响 | 第102-103页 |
| ·赤拟谷盗dsRNA的吸收机制 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 全文总结与展望 | 第106-107页 |
| 1 总结 | 第106页 |
| 2 本研究创新之处 | 第106页 |
| 3 问题与展望 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 附录Ⅰ 本论文所用引物列表 | 第121-123页 |
| 附录Ⅱ 本论文克隆的所有基因序列 | 第123-128页 |
| 作者简介 | 第128页 |
