养殖底泥和农用土壤抗生素抗性组学研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-16页 |
| ·抗生素抗性 | 第11页 |
| ·抗生素抗性机制 | 第11-12页 |
| ·抗生素抗性基因（ARGS）—一种新型环境污染物 | 第12页 |
| ·抗生素抗性组的内涵及研究意义 | 第12-13页 |
| ·抗生素抗性组学研究进展 | 第13-14页 |
| ·抗性组学研究展望 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 第2章 实验材料 | 第16-22页 |
| ·样品来源及处理 | 第16页 |
| ·菌株与质粒 | 第16-17页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第17-18页 |
| ·培养基和抗生素 | 第18-19页 |
| ·实验仪器 | 第19-22页 |
| 第3章 实验流程及方法 | 第22-34页 |
| ·实验流程图 | 第22页 |
| ·测农用土壤和养殖底泥理化性质 | 第22-23页 |
| ·质粒 DNA 的制备 | 第23页 |
| ·质粒 DNA 的酶切 | 第23页 |
| ·质粒 DNA 酶切片段的分离与回收 | 第23-24页 |
| ·质粒 DNA 的去磷酸化 | 第24-25页 |
| ·质粒 DNA 浓度的测定 | 第25-26页 |
| ·试剂准备 | 第25页 |
| ·标准品工作液稀释 | 第25页 |
| ·制备标准曲线 | 第25-26页 |
| ·样品分析 | 第26页 |
| ·环境样品总 DNA 的提取 | 第26-28页 |
| ·环境样品 DNA 不完全酶切 | 第28页 |
| ·环境样品 DNA 酶切产物的分离与回收 | 第28页 |
| ·环境样品 DNA 酶切产物的浓度测定 | 第28-29页 |
| ·质粒与 DNA 片段的连接 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·制备电转化的感受态 | 第29页 |
| ·电击转化 | 第29-30页 |
| ·文库评价 | 第30页 |
| ·文库的扩增与保存 | 第30-31页 |
| ·抗性克隆筛选 | 第31-34页 |
| ·微量稀释法测定宿主菌最低抑制浓度 | 第31页 |
| ·文库的扩增 | 第31-32页 |
| ·文库的筛选 | 第32页 |
| ·菌落 PCR 验证 | 第32-33页 |
| ·RFLP 分析 | 第33页 |
| ·测序及序列分析 | 第33页 |
| ·抗性克隆子保存 | 第33-34页 |
| 第4章 结果 | 第34-48页 |
| ·农用土壤和养殖底泥理化性质 | 第34页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第34-36页 |
| ·样品总 DNA 的提取与酶切 | 第34-35页 |
| ·酶切后样品 DNA 与质粒 DNA 浓度的测定 | 第35页 |
| ·文库的构建 | 第35-36页 |
| ·文库的评价 | 第36页 |
| ·克隆文库的筛选 | 第36-48页 |
| ·测定抗生素的最低抑制浓度 | 第36页 |
| ·文库筛选的结果 | 第36-48页 |
| 第5章 讨论 | 第48-53页 |
| ·氨基糖苷类抗生素抗性基因 | 第48页 |
| ·四环素类抗生素抗性基因 | 第48-50页 |
| ·氯霉素抗性基因 | 第50页 |
| ·利福平抗性基因 | 第50-51页 |
| ·抗性组学方法的优缺点 | 第51页 |
| ·抗性组学方法的优点 | 第51页 |
| ·抗性组学方法的缺点 | 第51页 |
| ·文库构建方法比较 | 第51-53页 |
| 第6章 总结与展望 | 第53-55页 |
| ·总结 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第60页 |
