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绿盲蝽触角均一化全长cDNA文库构建与化学感受蛋白基因发掘研究

符号说明第1-8页
摘要第8-10页
Abstract第10-12页
1 前言第12-22页
   ·昆虫触角感器的结构及感受机制第13-15页
   ·昆虫化学感受蛋白研究进展第15-16页
   ·昆虫化学感受蛋白的种类第16-17页
   ·昆虫化学感受蛋白的分子结构第17-18页
   ·昆虫化学感受蛋白表达分布情况第18-19页
   ·昆虫化学感受蛋白功能第19-20页
   ·立题依据第20页
   ·研究内容第20-22页
2 材料与方法第22-37页
   ·雌雄绿盲蝽的触角 CDNA 文库的构建第22-28页
     ·试验用昆虫第22页
     ·文库构建相关试剂、仪器以及引物序列第22页
     ·雌雄绿盲蝽触角总 RNA 的提取第22-23页
     ·第二链 cDNA 的合成第23-24页
     ·cDNA 的回收第24页
     ·杂交第24页
     ·DSN 处理第24-25页
     ·蛋白酶 K 处理第25页
     ·Sfi 酶切第25-26页
     ·按照片段大小分离 ds cDNA第26页
     ·ds cDNA 和载体 TriplEx2 的连接第26页
     ·噬菌体颗粒的蛋白质包装第26页
     ·cDNA 文库库容滴度检测第26-27页
     ·cDNA 文库的转型第27页
     ·插入片段大小 PCR 检测及重组率检测第27页
     ·冗余度检测第27-28页
     ·原始 cDNA 文库的测序第28页
   ·绿盲蝽触角 CDNA 文库的生物信息学的分析第28-33页
     ·文库质量评估第28页
     ·聚类分析第28页
     ·序列比对第28页
     ·功能注释第28-29页
     ·绿盲蝽化学感受蛋白基因鉴定第29页
     ·克隆绿盲蝽化学感受蛋白基因全长序列第29-33页
       ·试验用虫和试剂等第29页
       ·绿盲蝽总 RNA 的提取第29-30页
       ·绿盲蝽触角第一链 cDNA 的合成第30页
       ·AlucCSP1-8 的 DNA 聚合酶链式反应第30-31页
       ·PCR 产物电泳凝胶回收纯化第31-32页
       ·DNA 片段与 PGEM-T 载体连接第32页
       ·转化连接产物进入感受态细胞并测序第32-33页
       ·测序结果比对第33页
   ·绿盲蝽化学感受蛋白基因组织表达谱分析第33-37页
     ·虫源第33页
     ·试剂第33-34页
     ·实验步骤第34-37页
       ·绿盲蝽各不同部位的总 RNA 的提取第34页
       ·基因组 DNA 的消化第34页
       ·第一链 cDNA 的合成第34页
       ·引物的设计合成第34-35页
       ·目的基因和内参基因扩增效率一致性的验证第35页
       ·荧光定量 PCR第35-36页
       ·Real-time PCR 的数据分析方法第36-37页
3 结果第37-57页
   ·CDNA 文库的构建结果第37-44页
     ·触角 cDNA 文库质量分析第37-41页
     ·绿盲蝽触角 cDNA 文库生物信息学分析第41-44页
   ·化学感受蛋白基因生物信息学分析第44-51页
     ·化学感受蛋白基因鉴定第44-45页
     ·化学感受蛋白氨基酸序列相似性比较第45页
     ·化学感受蛋白氨基酸序列 Neighbor-joining 进化树的构建第45-47页
     ·氨基酸序列分析第47页
     ·推导氨基酸序列及信号肽分析第47-51页
   ·荧光定量结果第51-57页
     ·目的基因和内参基因扩增效率的验证第51-52页
     ·绿盲蝽气味结合蛋白 CSPs 的表达谱分析第52-57页
4 讨论第57-61页
   ·绿盲蝽触角 CDNA 文库第57-58页
   ·化学感受蛋白基因鉴别分析第58页
   ·ALUCCSPS 组织表达谱第58-61页
5 全文结论第61-62页
6 参考文献第62-69页
致谢第69-71页
攻读硕士期间发表论文情况第71页

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