| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-25页 |
| ·木聚糖 | 第13页 |
| ·木聚糖酶 | 第13-17页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第13-14页 |
| ·木聚糖酶的结构 | 第14-15页 |
| ·木聚糖酶催化机制 | 第15-17页 |
| ·木聚糖酶的来源与多样性 | 第17-18页 |
| ·木聚糖酶的协同效应 | 第18页 |
| ·木聚糖酶的性质 | 第18-20页 |
| ·木聚糖的应用 | 第20-21页 |
| ·木聚糖酶的研究进展 | 第21-23页 |
| ·传统选育 | 第21页 |
| ·细胞固定化技术 | 第21页 |
| ·木聚糖酶的原核表达 | 第21页 |
| ·木聚糖酶在酿酒酵母中的表达 | 第21-22页 |
| ·木聚糖酶在毕赤酵母中的表达 | 第22页 |
| ·木聚糖酶在丝状真菌中的表达 | 第22页 |
| ·定点突变 | 第22页 |
| ·易错PCR | 第22页 |
| ·木聚糖酶基因的表达调控 | 第22-23页 |
| ·宏基因组学技术 | 第23页 |
| ·选题依据 | 第23页 |
| ·技术路线 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·酶与试剂 | 第25页 |
| ·培养基与溶液 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-37页 |
| ·黑曲霉液体发酵生产木聚糖酶初始条件 | 第26页 |
| ·黑曲霉产木聚糖酶最优碳源研究 | 第26页 |
| ·黑曲霉产木聚糖酶最优氮源研究 | 第26页 |
| ·培养基初始pH对黑曲霉产木聚糖酶的影响 | 第26页 |
| ·CaCO_3含量对黑曲霉产木聚糖酶的影响 | 第26-27页 |
| ·正交实验 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的化学转化 | 第28页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量制备 | 第28页 |
| ·质粒与xynB基因的酶切 | 第28-29页 |
| ·酿酒酵母感受态的制备 | 第29页 |
| ·酿酒酵母的化学转化 | 第29页 |
| ·酿酒酵母中的质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·黑曲霉基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·聚合酶链式反应扩增黑曲霉xynB基因 | 第31页 |
| ·xynB基因核酸序列分析 | 第31页 |
| ·xynB基因内含子的去除 | 第31-32页 |
| ·去除内含子的xynB基因与编码α信号肽的核酸序列的融合 | 第32页 |
| ·xynB基因编码的木聚糖酶B的信号肽预测和分析 | 第32页 |
| ·木聚糖酶B结构域预测和分析 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33页 |
| ·重组酿酒酵母的鉴定 | 第33页 |
| ·重组木聚糖酶B的诱导表达 | 第33页 |
| ·重组酿酒酵母粗酶液的制备 | 第33页 |
| ·重组木聚糖酶B的纯化 | 第33-34页 |
| ·木聚糖酶活力的测定 | 第34页 |
| ·木糖标准曲线的绘制 | 第34页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第34-35页 |
| ·蛋白质标准曲线的绘制 | 第35页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE鉴定 | 第35页 |
| ·重组木聚糖酶B最适温度与最适pH | 第35页 |
| ·重组木聚糖酶B的温度与pH稳定性 | 第35-36页 |
| ·金属离子对重组木聚糖酶B活力的影响 | 第36页 |
| ·木聚糖酶B米氏常数K_m值、V_(max)值的测定 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-52页 |
| ·黑曲霉产木聚糖酶的最适碳源 | 第37页 |
| ·黑曲霉生产木聚糖酶最适氮源 | 第37-38页 |
| ·培养基初始pH对黑曲霉产木聚糖酶的影响 | 第38-39页 |
| ·CaCO_3含量对黑曲霉产生木聚糖酶的影响 | 第39-40页 |
| ·正交试验 | 第40-41页 |
| ·聚合酶链式反应扩增黑曲霉xynB基因 | 第41页 |
| ·xynB基因外显子、内含子预测 | 第41页 |
| ·黑曲霉xynB基因内含子的去除 | 第41-42页 |
| ·去除内含子的xynB基因与α信号肽基因的融合 | 第42-43页 |
| ·xynB基因核酸序列分析 | 第43页 |
| ·木聚糖酶B的信号肽预测与分析 | 第43-44页 |
| ·木聚糖酶B的结构域预测和分析 | 第44页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·酿酒酵母化学转化与重组酿酒酵母的鉴定 | 第45页 |
| ·木聚糖酶B的诱导表达 | 第45页 |
| ·诱导时间与信号肽对木聚糖酶B诱导表达的影响 | 第45-46页 |
| ·重组木聚糖酶B的SDS-PAGE检测 | 第46-47页 |
| ·重组木聚糖酶B的最适温度与最适pH测定 | 第47-48页 |
| ·重组木聚糖酶B的温度与pH稳定性 | 第48-49页 |
| ·金属离子对重组木聚糖酶B活力的影响 | 第49-50页 |
| ·木聚糖酶B Km值、Vmax和比活力的测定 | 第50页 |
| ·木糖标准曲线 | 第50-51页 |
| ·蛋白质标准曲线 | 第51-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-54页 |
| ·培养基初始pH和CaCO_3含量对黑曲霉产木聚糖酶的影响 | 第52页 |
| ·正交实验 | 第52页 |
| ·重叠延伸PCR法用于内含子去除、α信号肽基因与成熟肽基因连接 | 第52-53页 |
| ·信号肽对木聚糖酶表达量的影响 | 第53-54页 |
| 第五章 结论与展望 | 第54-56页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·黑曲霉液体发酵生产木聚糖酶的产酶条件优化 | 第54页 |
| ·黑曲霉xynB基因的克隆、异源表达与酶学性质测定 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-56页 |
| ·提高黑曲霉生产木聚糖酶水平 | 第54页 |
| ·提高木聚糖酶B异源表达水平 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 附录 | 第66-72页 |
| 附录Ⅰ：溶液配制 | 第66-68页 |
| 附录Ⅱ：培养基配制 | 第68-69页 |
| 附录Ⅲ：xynB基因核酸序列(GenBank登录号：CK417493) | 第69-70页 |
| 附录Ⅳ：xynB基因核酸序列比对 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第73页 |
