| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-20页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·研究背景 | 第12-19页 |
| ·黑曲霉葡萄糖氧化酶的性质 | 第12-13页 |
| ·黑曲霉葡萄糖氧化酶的生产研究进展 | 第13-18页 |
| ·黑曲霉葡萄糖氧化酶的基因改造 | 第18页 |
| ·葡萄糖氧化酶的分离纯化 | 第18-19页 |
| ·论文选题的意义及思路 | 第19-20页 |
| ·研究意义 | 第19页 |
| ·论文的研究思路 | 第19-20页 |
| 第2章 高葡萄糖氧化酶活力黑曲霉菌株的筛选 | 第20-32页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌种 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·试剂的配制方法 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·黑曲霉孢子悬液的制备 | 第23页 |
| ·菌体干重的测定 | 第23页 |
| ·发酵液残糖的测定 | 第23-24页 |
| ·高效液相色谱法测定葡萄糖酸钠含量 | 第24页 |
| ·平板初筛 | 第24-25页 |
| ·摇瓶复筛 | 第25页 |
| ·实验结果和讨论 | 第25-31页 |
| ·平板初筛 | 第25-27页 |
| ·发酵液残糖的测定 | 第27-28页 |
| ·高效液相色谱法测定葡萄糖酸钠含量 | 第28-30页 |
| ·摇瓶复筛 | 第30-31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 葡萄糖氧化酶活力测定方法的确定 | 第32-42页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·菌种 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·试剂的配制方法 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·连续分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力 | 第34页 |
| ·滴定法测定葡萄糖氧化酶活力 | 第34-35页 |
| ·黑曲霉的培养 | 第35页 |
| ·实验结果和讨论 | 第35-41页 |
| ·连续分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力 | 第35-37页 |
| ·滴定法测定葡萄糖氧化酶活力 | 第37-38页 |
| ·连续分光光度法和滴定法的换算关系 | 第38-39页 |
| ·两种方法的比较与使用建议 | 第39-40页 |
| ·连续分光光度法测定黑曲霉发酵液酶活力研究 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 黑曲霉 QYW3221 葡萄氧化酶基因的克隆 | 第42-58页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-45页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·分子生物学试剂与酶 | 第42-43页 |
| ·主要生化试剂 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·试剂的配制方法 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·黑曲霉基因组 DNA 的提取与琼脂糖凝胶电泳检测 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第46页 |
| ·引物的设计 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制作与转化 | 第47-48页 |
| ·葡萄糖氧化酶基因的 PCR 扩增与产物的纯化 | 第48-49页 |
| ·PCR 扩增片段末端加“A”、T-A 克隆与蓝白斑筛选 | 第49-50页 |
| ·重组子的 PCR 筛选 | 第50页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·DNA 序列的测定与分析 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-56页 |
| ·黑曲霉基因组 DNA 的提取 | 第51页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第51-52页 |
| ·葡萄糖氧化酶基因的 PCR 扩增 | 第52-53页 |
| ·重组子的 PCR 筛选 | 第53页 |
| ·重组克隆载体的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·DNA 序列测定与分析 | 第54-56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第5章 葡萄糖氧化酶在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第58-76页 |
| ·引言 | 第58-61页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统概述 | 第58页 |
| ·宿主菌株与载体 | 第58-61页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·菌种与质粒 | 第61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·分子生物学试剂与酶 | 第61页 |
| ·主要生化试剂 | 第61页 |
| ·试剂的配制方法 | 第61-62页 |
| ·培养基 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-69页 |
| ·重组质粒的 PCR | 第63-64页 |
| ·PCR 片段和载体的酶切与胶回收 | 第64-65页 |
| ·载体与 PCR 片段的连接、转化与重组子的 PCR 筛选 | 第65-66页 |
| ·重组毕赤酵母表达载体的酶切验证和测序验证 | 第66页 |
| ·重组表达载体的线性化、抽提纯化与浓缩 | 第66页 |
| ·巴斯德毕赤酵母 SMD1168 电转化感受态的制备与转化 | 第66-67页 |
| ·酵母基因组 DNA 的提取 | 第67-68页 |
| ·高拷贝转化子的筛选与 PCR 鉴定 | 第68-69页 |
| ·酵母转化子甲醇利用表型的鉴定 | 第69页 |
| ·阳性转化子的诱导表达与酶活测定 | 第69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-74页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达载体的构建 | 第69-70页 |
| ·巴斯德毕赤酵母 SMD1168 的电转化 | 第70-71页 |
| ·酵母基因组 DNA 的提取 | 第71页 |
| ·高拷贝重组子的筛选与 PCR 验证 | 第71-72页 |
| ·酵母转化子甲醇利用表型的鉴定 | 第72-73页 |
| ·阳性转化子的诱导表达与酶活测定 | 第73-74页 |
| ·本章小结 | 第74-76页 |
| 第6章 结论和展望 | 第76-78页 |
| ·结论 | 第76页 |
| ·展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第88页 |
