| 摘要 | 第1-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一章 快速检测鉴定未知病毒方法的建立 | 第9-25页 |
| ·样品的处理与富集 | 第9-10页 |
| ·非特异性扩增 | 第10-11页 |
| ·多重置换扩增 | 第10页 |
| ·变性寡核苷酸引物PCR | 第10页 |
| ·引物延伸预扩增PCR | 第10页 |
| ·Omniplex全基因组扩增 | 第10-11页 |
| ·序列非依赖检测方法 | 第11-12页 |
| ·代表性差异分析(RDA)和抑制消减杂交技术(SSH) | 第11页 |
| ·序列非依赖的单引物扩增(SISPA) | 第11页 |
| ·随机PCR | 第11页 |
| ·表达cDNA文库 | 第11-12页 |
| ·高通量测序 | 第12页 |
| ·材料 | 第12-15页 |
| ·样品来源 | 第12页 |
| ·质粒与菌种 | 第12页 |
| ·主要试剂 | 第12-13页 |
| ·试剂盒 | 第12页 |
| ·PCR扩增所用Taq酶 | 第12-13页 |
| ·DNA Maker | 第13页 |
| ·抗生素 | 第13页 |
| ·细菌培养基主要成分 | 第13页 |
| ·生化试剂 | 第13页 |
| ·试验用具 | 第13页 |
| ·仪器设备 | 第13页 |
| ·试剂配制 | 第13-15页 |
| ·琼脂糖电泳和凝胶加样缓冲液 | 第14页 |
| ·其它常用试剂和缓冲液 | 第14页 |
| ·细菌培养基 | 第14-15页 |
| ·方法 | 第15-20页 |
| ·Virus-Discovery-cDNA-RAPD(VIDISCR)引物的设计 | 第15-16页 |
| ·标本的前处理 | 第16页 |
| ·未知病毒DNA(或RNA)抽提 | 第16-17页 |
| ·RT-PCR | 第17-18页 |
| ·凝胶电泳的结果观察 | 第18页 |
| ·PCR产物纯化 | 第18-19页 |
| ·连接pMD18-T载体 | 第19页 |
| ·转化 | 第19页 |
| ·阳性菌落的筛选与克隆 | 第19页 |
| ·菌液鉴定 | 第19-20页 |
| ·测序鉴定序列比对及系统发育分析 | 第20页 |
| ·结果 | 第20-23页 |
| ·采用VIDISCR方法对猴空泡病毒(SV40)和猴副流感病毒(SV5)检出结果 | 第20-23页 |
| ·其他插入序列的比对结果 | 第23页 |
| ·Virus-Discovery-cDNA-RAPD(VIDISCR)反应系统的建立 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-25页 |
| 第二章 采用VIDISCR方法对云南边境白纹伊蚊蚊体样品的检测 | 第25-33页 |
| ·盖塔病毒分离概况 | 第25-26页 |
| ·盖塔病毒的生物学特性 | 第26-27页 |
| ·盖塔蛋白非结构区 | 第26-27页 |
| ·盖塔病毒结构区 | 第27页 |
| ·盖塔病毒nsP3特征 | 第27页 |
| ·主要媒介生物 | 第27页 |
| ·材料和方法 | 第27-28页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·白蚊伊蚊匀浆 | 第27-28页 |
| ·传代接种部位及剂量 | 第28页 |
| ·方法 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-31页 |
| ·随机引物对白蚊伊蚊RT-PCR扩增出的结果 | 第28-29页 |
| ·盖塔病毒NS3基因序列 | 第29-30页 |
| ·盖塔病毒NS3基因同源性及系统发育树分析结果 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 采用VIDISCR方法对云南边境蝙蝠样品的检测 | 第33-43页 |
| ·呼肠孤病毒的生物学特性 | 第34页 |
| ·呼肠孤病毒的宿主 | 第34页 |
| ·呼肠孤病毒的病原性 | 第34页 |
| ·材料和方法 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·蝙蝠样品处理 | 第35页 |
| ·方法 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-42页 |
| ·VIDISCR对蝙蝠样品CY3-4的检测结果 | 第35-36页 |
| ·蝙蝠样品CY3-4基因序列、同源性及系统树分析 | 第36-39页 |
| ·VIDISCR对蝙蝠样品CY72-74检测的结果 | 第39-42页 |
| ·随机引物对蝙蝠样品CY72-74RT-PCR扩增的结果 | 第39-40页 |
| ·呼肠孤病毒M2部分基因序列 | 第40-41页 |
| ·呼肠孤病毒M2部分基因同源性及系统发育树分析结果 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| 全文结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| Abstract | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
