| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩写词 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-26页 |
| 1 水仙品种资源概述 | 第14-15页 |
| 2 高等植物类胡萝卜素生物合成的研究进展 | 第15-18页 |
| ·高等植物类胡萝卜素生物合成途径 | 第15-16页 |
| ·高等植物类胡萝卜素生物合成的调控机 | 第16-17页 |
| ·叶片中类胡萝卜素调控机制研究 | 第16-17页 |
| ·果实与花中类胡萝卜素调控机制研究 | 第17页 |
| ·类胡萝卜素生物合成的基因工程研究进展 | 第17-18页 |
| 3 高等植物 MYB 转录因子的研究进展 | 第18-19页 |
| 4 质体及 CHRC 基因与类胡萝卜素积累机制的研究 | 第19-21页 |
| 5 BCH 基因的研究进展 | 第21-22页 |
| 6 中国水仙花色基因工程研究进展 | 第22-25页 |
| ·水仙花色素成分和功能基因研究进展 | 第22-23页 |
| ·中国水仙转基因技术研究进展 | 第23-25页 |
| ·水仙的离体培养及再生体系研究 | 第23-24页 |
| ·农杆菌介导的中国水仙遗传转化研究 | 第24页 |
| ·反义技术在基因工程中的研究 | 第24-25页 |
| 7 本研究的科学意义及研究内容 | 第25-26页 |
| ·本研究的科学意义 | 第25页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 类胡萝卜素合成结构基因在几个水仙品种中的表达 | 第26-39页 |
| 1 试验材料 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·主要试剂盒和仪器 | 第26-27页 |
| ·引物合成 | 第27页 |
| 2 试验方法 | 第27-30页 |
| ·水仙花瓣和副冠的总 RNA 的提取、检测 | 第27页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第27页 |
| ·类胡萝卜素合成相关基因的表达分析 | 第27-30页 |
| ·半定量 RT-PCR 反应 | 第27-28页 |
| ·实时定量 qRT-PCR 反应 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-36页 |
| ·水仙花瓣、副冠总 RNA 的电泳图和质量检测 | 第30-31页 |
| ·水仙类胡萝卜素合成途径结构基因的半定量 RT-PCR 表达 | 第31页 |
| ·水仙类胡萝卜素途径结构基因的实时定量 qRT-PCR 表达 | 第31-36页 |
| ·水仙类胡萝卜素相关基因的标准曲线 | 第31-33页 |
| ·水仙类胡萝卜素合成途径结构基因的特异性扩增 | 第33-35页 |
| ·水仙类胡萝卜素合成途径结构基因的定量 qRT-PCR 表达 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 漳州水仙 CHRC 的克隆与表达研究 | 第39-52页 |
| 1 试验材料 | 第39-40页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·常用药品和仪器 | 第39-40页 |
| ·主要试剂盒 | 第40页 |
| ·引物合成 | 第40页 |
| 2 试验方法 | 第40-43页 |
| ·水仙总 RNA 提取、检测 | 第40页 |
| ·cDNA 合成 | 第40页 |
| ·引物合成 | 第40-41页 |
| ·PCR 扩增 | 第41-42页 |
| ·目的片段的回收、连接、转化和菌液 PCR 检测 | 第42页 |
| ·回收目的片段 | 第42页 |
| ·连接、转化 | 第42页 |
| ·菌液 PCR 检测 | 第42页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-50页 |
| ·Total RNA 的提取与纯度检测 | 第43页 |
| ·漳州水仙 CHRC 基因 cDNA 全长的克隆 | 第43-46页 |
| ·漳州水仙 CHRC 基因保守区的克隆 | 第43-44页 |
| ·漳州水仙 CHRC 基因 3′RACE 的克隆 | 第44-45页 |
| ·漳州水仙 CHRC 基因 5′RACE 的克隆 | 第45-46页 |
| ·漳州水仙 CHRC 基因开放阅读框的克隆 | 第46页 |
| ·漳州水仙 CHRC 基因的序列分析 | 第46-49页 |
| ·漳州水仙 CHRC 基因的氨基酸同源性分析 | 第46-47页 |
| ·漳州水仙 CHRC 信号肽、跨膜和蛋白二级结构 | 第47-49页 |
| ·漳州水仙 CHRC 基因的系统进化树分析 | 第49-50页 |
| ·两种水仙 CHRC 基因的半定量表达 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 水仙 MYB 基因的克隆与分析 | 第52-62页 |
| 1 试验材料 | 第52-53页 |
| ·植物材料 | 第52页 |
| ·载体和菌株 | 第52页 |
| ·试剂和仪器 | 第52-53页 |
| 2 试验方法 | 第53-55页 |
| ·洋水仙花瓣总 RNA 提取、检测 | 第53页 |
| ·cDNA 合成 | 第53页 |
| ·引物设计与合成 | 第53页 |
| ·PCR 扩增 | 第53-54页 |
| ·目的片段的回收、连接、转化和阳性克隆的 PCR 检测 | 第54-55页 |
| ·目的片段的回收 | 第54页 |
| ·目的片段与 T 载体连接 | 第54页 |
| ·连接产物的转化 | 第54页 |
| ·菌液 PCR 检测 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-61页 |
| ·Total RNA 的提取与纯度检测 | 第55页 |
| ·MYB 基因的克隆 | 第55-56页 |
| ·MYB 基因保守片段的克隆 | 第55-56页 |
| ·NpMYB2 基因 3’RACE 的克隆 | 第56页 |
| ·MYB 基因的序列分析 | 第56-60页 |
| ·NpMYB1 基因的序列分析 | 第56-57页 |
| ·NpMYB2 基因的序列分析 | 第57-60页 |
| ·MYB 基因的系统进化树分析 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 BCH 反义植物表达载体的构建与转化初步研究 | 第62-74页 |
| 1 试验材料 | 第62-64页 |
| ·植物材料 | 第62-63页 |
| ·漳州水仙花葶的消毒和接种 | 第63页 |
| ·载体和菌株 | 第63页 |
| ·试剂和仪器 | 第63页 |
| ·培养基和培养条件 | 第63-64页 |
| 2 试验方法 | 第64-68页 |
| ·漳州水仙 BCH 基因的克隆 | 第64-65页 |
| ·漳州水仙黄色副冠总 RNA 提取、检测 | 第64页 |
| ·cDNA 的合成 | 第64页 |
| ·引物设计 | 第64页 |
| ·漳州水仙 BCH 基因 cDNA 全长序列的 PCR 扩增 | 第64页 |
| ·目的片段的回收、连接、转化和阳性克隆的 PCR 检测 | 第64页 |
| ·目的片段的回收 | 第64页 |
| ·目的片段与 T 载体连接 | 第64页 |
| ·连接产物的转化 | 第64页 |
| ·菌液 PCR 检测 | 第64页 |
| ·质粒的提取 | 第64-65页 |
| ·BCH 反义植物表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·pMD-18T-BCH 和 pCAMBIA 1301 质粒的提取 | 第65页 |
| ·质粒双酶切及目的片段回收 | 第65-66页 |
| ·目的基因与载体 DNA 连接 | 第66页 |
| ·连接产物的转化 | 第66页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第66页 |
| ·PCR 检测鉴定 | 第66页 |
| ·酶切鉴定 | 第66页 |
| ·pC1301-反义 BCH 表达载体对农杆菌 EHA105 的导入 | 第66-67页 |
| ·pC1301-反义 BCH 菌液培养及质粒提取 | 第66页 |
| ·农杆菌 EHA105 的培养 | 第66页 |
| ·农杆菌 EHA105 感受态细胞的制备与转化 | 第66-67页 |
| ·制备农杆菌 EHA105 感受态细胞 | 第66页 |
| ·重组质粒转化农杆菌 | 第66-67页 |
| ·pC1301-反义 BCH 质粒导入 EHA105 的鉴定与保存 | 第67页 |
| ·BCH 反义基因转化漳州水仙的初步研究 | 第67-68页 |
| ·E/pC1301-反义 BCH 农杆菌侵染液的制备 | 第67页 |
| ·根癌农杆菌转化漳州水仙花葶的基本步骤 | 第67页 |
| ·以不同的筛选方式转化漳州水仙 | 第67-68页 |
| ·培养抗性植株 | 第68页 |
| ·抗性芽筛选培养 | 第68页 |
| ·抗性芽增殖培养 | 第68页 |
| ·统计转化数据 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-71页 |
| ·漳州水仙 BCH 基因的 PCR 扩增 | 第68-69页 |
| ·BCH 反义植物表达载体的构建 | 第69-70页 |
| ·pCAMBIA 1301 和 pMD-18T-BCH 质粒的双酶切结果 | 第69-70页 |
| ·重组质粒 pC1301-反义 BCH 的 PCR 和酶切鉴定结果 | 第70页 |
| ·pC1301-反义 BCH 表达载体对农杆菌 EHA105 的导入 | 第70-71页 |
| ·EHA105/pC1301-BCH 转化漳州水仙初步研究结果 | 第71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| ·漳州水仙 BCH 基因的克隆及反义植物表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·农杆菌介导的漳州水仙花葶转化 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
