| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| 1 目前国内外的研究现状 | 第14-20页 |
| ·过继细胞免疫治疗 | 第14-16页 |
| ·过继细胞免疫治疗的分类 | 第14-15页 |
| ·效应T细胞的体外增殖 | 第15-16页 |
| ·CAR 的分子结构及其生物学作用 | 第16-20页 |
| ·CAR 的分子结构 | 第16-18页 |
| ·CAR 的生物学作用 | 第18-20页 |
| 2 慢病毒载体系统 | 第20页 |
| 3 VEGFR-1、CD28 抗原及 CXCR3 基因 | 第20-21页 |
| 4 本课题的研究目的 | 第21-23页 |
| 第二章 携带CAR的慢病毒包装及滴度测定 | 第23-37页 |
| 1 前言 | 第23页 |
| 2 实验器材 | 第23-26页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·主要的实验仪器与设备 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| 3 方法 | 第26-32页 |
| ·pLV120gn-FLT1CAR载体构建 | 第26-29页 |
| ·目的基因合成 | 第26页 |
| ·酶切 | 第26页 |
| ·酶切产物回收 | 第26-27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27-28页 |
| ·质粒 pLV120gn-FLT1CAR 的筛选 | 第28页 |
| ·质粒 pLV120gn-FLT1CAR 的鉴定 | 第28-29页 |
| ·质粒 pLV120gn-FLT1CAR 的大量制备及鉴定 | 第29-31页 |
| ·质粒的大量制备 | 第29页 |
| ·质粒的鉴定 | 第29-31页 |
| ·病毒包装、浓缩和感染测试 | 第31-32页 |
| ·病毒包装 | 第31-32页 |
| ·病毒浓缩 | 第32页 |
| ·病毒感染 Huh7 细胞 | 第32页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第32页 |
| 4 结果 | 第32-36页 |
| ·质粒 pLV120gn-FLT1CAR 构建的电泳鉴定 | 第32-33页 |
| ·大量制备质粒 pLV120gn-FLT1CAR 的酶切鉴定 | 第33-35页 |
| ·包装慢病毒感染 Huh7 | 第35页 |
| ·病毒滴度测定 | 第35-36页 |
| 5 讨论 | 第36页 |
| 6 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 稳转 Jurka t细胞株的筛选 | 第37-44页 |
| 1 前言 | 第37页 |
| 2 实验器材 | 第37-38页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·所需的主要仪器 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要试剂的配制 | 第38页 |
| 3 方法 | 第38-39页 |
| ·G418 筛选 Jurkat 细胞的浓度确定 | 第38-39页 |
| ·慢病毒感染 Jurkat 细胞 | 第39页 |
| ·G418 筛选 Jurkat 细胞株 | 第39页 |
| ·表达绿荧光 Jurkat 细胞的克隆挑选 | 第39页 |
| 4 结果 | 第39-43页 |
| ·最优 G418 浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·慢病毒感染 Jurkat 细胞的结果 | 第40-41页 |
| ·经 G418 筛选 Jurkat 后的结果 | 第41页 |
| ·绿荧光 Jurkat 细胞的克隆形成29 | 第41-42页 |
| ·绿荧光 Jurkat 细胞的大量扩增 | 第42-43页 |
| 5 讨论 | 第43页 |
| 6 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 表达 FLT1CAR 细胞株的鉴定及功能伤研究 | 第44-53页 |
| 1 前言 | 第44页 |
| 2 实验器材 | 第44-45页 |
| ·实验所需材料 | 第44页 |
| ·实验所需仪器 | 第44-45页 |
| ·实验所需主要试剂 | 第45页 |
| ·所需引物 | 第45页 |
| 3 实验方法 | 第45-48页 |
| ·细胞培养 | 第45-46页 |
| ·所筛选 Jurkat 细胞株的基因组提取 | 第46-47页 |
| ·PCR 鉴定目的基因的整合 | 第47页 |
| ·流式细胞术检测所筛选细胞株的表达率 | 第47页 |
| ·所筛选 Jurkat 细胞株对 VEGF 的迁移效果检测 | 第47-48页 |
| 4 实验结果 | 第48-51页 |
| ·PCR 鉴定目的基因的电泳图 | 第48-50页 |
| ·细胞株 FLT1CAR 表达率 | 第50-51页 |
| ·Jurkat 细胞株对VEGF的迁移实验3 | 第51页 |
| 5 讨论 | 第51-52页 |
| 6 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
