| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-38页 |
| ·天然小分子化合物及组合生物合成 | 第13-18页 |
| ·天然小分子化合物的生物合成 | 第13-16页 |
| ·组合生物合成及其在聚酮合酶改造中的应用 | 第16-18页 |
| ·聚酮类化合物的生物合成机制及基因簇序列确定方法 | 第18-29页 |
| ·聚酮类化合物的生物合成机制 | 第18-26页 |
| ·基因簇序列确定方法 | 第26-29页 |
| ·马来酸酐类化合物 | 第29-36页 |
| ·互变霉素 | 第30-31页 |
| ·变构菌素 | 第31-36页 |
| ·本课题的研究意义及内容 | 第36-38页 |
| 2 变构菌素产生菌S.griseochromogenes遗传操作方法的确定和条件优化 | 第38-53页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料与方法 | 第38-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第38页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第38-39页 |
| ·主要药品及生化试剂 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌感受态制备等基本操作 | 第40页 |
| ·链霉菌培养等基本操作 | 第40页 |
| ·变构菌素产生菌原生质体制备、再生及转化 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌-变构菌素产生菌属间的接合转移 | 第41-42页 |
| ·实验用引物序列 | 第42页 |
| ·接合转移子的验证 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-50页 |
| ·原生质体转化法地尝试 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌-变构菌素产生菌属间接合转移系统地建立及优化 | 第43-47页 |
| ·接合转移子地检测 | 第47-48页 |
| ·利用pSET152突变失活ttnD地尝试 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 3 二烷基马来酸酐合成相关基因ttnO和ttnK的功能研究 | 第53-67页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料与方法 | 第53-58页 |
| ·菌株和质粒 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53-54页 |
| ·主要药品及生化试剂 | 第54页 |
| ·大肠杆菌感受态制备等基本操作 | 第54页 |
| ·链霉菌培养等基本操作 | 第54页 |
| ·大肠杆菌-链霉菌属间的接合转移 | 第54页 |
| ·化学裂解法制备DA | 第54-55页 |
| ·PCR-targeting策略 | 第55页 |
| ·突变,检测及回复引物 | 第55-57页 |
| ·发酵 | 第57页 |
| ·变构菌素及其衍生物HPLC检测方法 | 第57页 |
| ·突变株发酵液的预处理 | 第57页 |
| ·微生物转化 | 第57页 |
| ·混合发酵 | 第57页 |
| ·生物信息学分析 | 第57-58页 |
| ·实验结果 | 第58-64页 |
| ·二烷基马来酸酐(DA)的分离纯化和结构鉴定 | 第58页 |
| ·突变株STQ0606(△ttnO)和STQ1211(△ttnK)的构建 | 第58-60页 |
| ·TtnO参与二烷基马来酸酐的生物合成 | 第60-61页 |
| ·TtnK编码的酯酶负责聚酮链与二烷基马来酸酐的酯化反应 | 第61-63页 |
| ·突变株STQ0606(△ttnO)和STQ1211(△ttnK)的的回复 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 4 PKS后修饰基因ttnF和ttnC/D的功能研究 | 第67-89页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·实验材料与方法 | 第67-71页 |
| ·菌株和质粒 | 第67页 |
| ·培养基 | 第67-68页 |
| ·主要药品及生化试剂 | 第68页 |
| ·大肠杆菌感受态制备等基本操作 | 第68页 |
| ·链霉菌培养等基本操作 | 第68页 |
| ·大肠杆菌-链霉菌属间的接合转移 | 第68页 |
| ·PCR-targeting策略 | 第68页 |
| ·突变,检测及回复引物 | 第68页 |
| ·发酵 | 第68页 |
| ·变构菌素及其衍生物HPLC检测方法 | 第68-69页 |
| ·微生物转化 | 第69页 |
| ·变构菌素衍生物的分离提纯 | 第69-70页 |
| ·生物信息学分析 | 第70-71页 |
| ·实验结果 | 第71-84页 |
| ·PKS后修饰基因突变株△ttnF,△ttnC和△tttnD的构建 | 第71-73页 |
| ·变构菌素衍生物TMC-Fs和TMC-Ds的分离与结构解析 | 第73-80页 |
| ·脱水酶TtnF负责变构菌素PKS后修饰中的脱水反应 | 第80页 |
| ·TMC的AT6结构域具有一定的底物选择非特异性 | 第80-82页 |
| ·TtnC编码的黄素蛋白脱羧酶不影响TMC的合成 | 第82-83页 |
| ·TtnD编码的UbiD家族脱羧酶负责PKS后修饰的脱羧反应 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| ·本章小结 | 第87-89页 |
| 5 PKS后修饰基因ttnI的功能研究 | 第89-101页 |
| ·引言 | 第89页 |
| ·实验材料与方法 | 第89-92页 |
| ·菌株和质粒 | 第89页 |
| ·培养基 | 第89-90页 |
| ·主要药品及生化试剂 | 第90页 |
| ·大肠杆菌感受态制备等基本操作 | 第90页 |
| ·链霉菌培养等基本操作 | 第90页 |
| ·大肠杆菌-链霉菌属间的接合转移 | 第90页 |
| ·PCR-targeting策略 | 第90页 |
| ·突变,检测及回复引物 | 第90页 |
| ·发酵 | 第90-91页 |
| ·变构菌素及其衍生物HPLC检测方法 | 第91页 |
| ·微生物转化 | 第91页 |
| ·变构菌素衍生物的分离提纯 | 第91页 |
| ·生物信息学分析 | 第91-92页 |
| ·实验结果 | 第92-96页 |
| ·突变株STQ1010(△ttnI)的构建 | 第92-93页 |
| ·变构菌素衍生物TMC-Is的分离及结构解析 | 第93-94页 |
| ·PKS后修饰酶TtnI催化5-酮基的形成 | 第94-95页 |
| ·TtnI催化5-羟基衍生物转化为5-酮基衍生物 | 第95页 |
| ·突变株的回复 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-100页 |
| ·本章小结 | 第100-101页 |
| 结论 | 第101-103页 |
| 展望 | 第103-104页 |
| 创新点摘要 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-112页 |
| 附录A 二烷基马来酸酐的NMR图谱 | 第112-113页 |
| 附录B 化合物TMC-Fs的MS和NMR图谱 | 第113-119页 |
| 附录C 化合物TMC-Ds的MS,IR和NMR图谱 | 第119-126页 |
| 附录D 化合物TMC-Is的MS和NMR图谱 | 第126-132页 |
| 附录E 专有名词缩写 | 第132-134页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
| 作者简介 | 第137-138页 |
