| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| ·脂肪酶 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶简介 | 第12页 |
| ·脂肪酶研究进展 | 第12页 |
| ·展望 | 第12-13页 |
| ·非天然氨基酸在蛋白质修饰中的应用 | 第13-24页 |
| ·非天然氨基酸种类 | 第13-15页 |
| ·蛋白质翻译后修饰 | 第15页 |
| ·密码子扩展法修饰蛋白质 | 第15-21页 |
| ·非天然氨基酸修饰蛋白质的应用现状和前景 | 第21-23页 |
| ·展望 | 第23-24页 |
| ·酶一步纯化与定点固定化研究进展 | 第24-25页 |
| ·酶传统固定化方法 | 第24页 |
| ·酶一步纯化与定点固定化 | 第24-25页 |
| ·展望 | 第25页 |
| ·选题背景、目的及主要内容 | 第25-27页 |
| 第二章 非天然氨基酸修饰脂肪酶重组质粒制备 | 第27-43页 |
| ·前言 | 第27页 |
| ·材料与方法 | 第27-33页 |
| ·菌种与质粒 | 第27页 |
| ·试剂与器材 | 第27-29页 |
| ·实验方法 | 第29-33页 |
| ·实验步骤 | 第33-38页 |
| ·pET28a-lip~(ald6)制备 | 第33页 |
| ·pBAD/myc-his A-FGE制备 | 第33-34页 |
| ·pACYC184-2 MjtRNAT_(CUA)~(Tyr)制备 | 第34-35页 |
| ·pBR322-MjTyrRS10制备 | 第35-37页 |
| ·pET24a-lip_(TAG)制备 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·脂肪酶修饰位点三维结构模拟 | 第38-40页 |
| ·MjTyrRS10基因密码子优化 | 第40页 |
| ·重组质粒目的基因验证 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 脂肪酶的甲酰甘氨酸修饰及定点正交固定化 | 第43-63页 |
| ·前言 | 第43-44页 |
| ·材料与方法 | 第44-50页 |
| ·试剂与仪器 | 第44-46页 |
| ·实验方法 | 第46-50页 |
| ·实验步骤 | 第50-54页 |
| ·甲酰甘氨酸脂肪酶蛋白表达、纯化 | 第50页 |
| ·甲酰甘氨酸脂肪酶醛基基团验证 | 第50页 |
| ·甲酰甘氨酸脂肪酶酶活测试 | 第50-51页 |
| ·甲酰甘氨酸修饰脂肪酶的定点正交固定化 | 第51页 |
| ·戊二醛固定脂肪酶 | 第51-52页 |
| ·戊二醛固定化脂肪酶、固定化甲酰甘氨酸脂肪酶动力学研究 | 第52-53页 |
| ·戊二醛固定化脂肪酶、固定化甲酰甘氨酸脂肪酶热稳定性 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-61页 |
| ·脂肪酶、甲酰甘氨酸脂肪酶表达与纯化 | 第54-55页 |
| ·甲酰甘氨酸脂肪酶醛基基团验证 | 第55-56页 |
| ·脂肪酶、甲酰甘氨酸脂肪酶酶活对比 | 第56页 |
| ·固定化脂肪酶与固定化甲酰甘氨酸脂肪酶酶活比较 | 第56-59页 |
| ·戊二醛固定化脂肪酶、固定化甲酰甘氨酸脂肪酶动力学研究 | 第59-60页 |
| ·戊二醛固定化脂肪酶、固定化甲酰甘氨酸脂肪酶热稳定性比较 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-63页 |
| 第四章 脂肪酶的对叠氮苯丙氨酸掺入修饰及正交点击固定化 | 第63-77页 |
| ·前言 | 第63-64页 |
| ·材料与方法 | 第64-66页 |
| ·试剂与仪器 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-66页 |
| ·实验步骤 | 第66-68页 |
| ·对叠氮苯丙氨酸脂肪酶表达、纯化 | 第66页 |
| ·对叠氮苯丙氨酸脂肪酶Western Blot | 第66页 |
| ·对叠氮苯丙氨酸脂肪酶ESI-MS检测 | 第66-67页 |
| ·对叠氮苯丙氨酸脂肪酶酶活测试 | 第67页 |
| ·对叠氮苯丙氨酸脂肪酶定点固定化 | 第67-68页 |
| ·固定化对叠氮苯丙氨酸脂肪酶酶活测试 | 第68页 |
| ·固定化对叠氮苯丙氨酸脂肪酶热稳定性 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-75页 |
| ·对叠氮苯丙氨酸脂肪酶制备 | 第68-70页 |
| ·对叠氮苯丙氨酸脂肪酶质谱验证 | 第70-71页 |
| ·脂肪酶、对叠氮苯丙氨酸脂肪酶酶活对比 | 第71-72页 |
| ·固定化对叠氮苯丙氨酸脂肪酶酶活研究 | 第72-74页 |
| ·固定化对叠氮苯丙氨酸脂肪酶热稳定性 | 第74-75页 |
| ·本章小结 | 第75-77页 |
| 第五章 结论与展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
