R型醛酮还原酶的克隆、鉴定及其催化制备（R）-CHBE的研究
| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 1 绪论 | 第12-21页 |
| ·醛酮还原酶概述 | 第12-14页 |
| ·醛酮还原酶 | 第12-13页 |
| ·醛酮还原酶在手性合成上的应用 | 第13-14页 |
| ·醛酮还原酶生物催化产业化存在的问题 | 第14页 |
| ·微生物转化生产手性CHBE | 第14-15页 |
| ·辅酶再生的策略概述 | 第15-17页 |
| ·酶催化的关键氨基酸位点的定点突变 | 第17-18页 |
| ·课题研究背景、意义与主要内容 | 第18-21页 |
| ·研究背景和意义 | 第18-19页 |
| ·研究主要内容 | 第19-21页 |
| 2 醛酮还原酶的克隆、鉴定及表达 | 第21-41页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料与试剂 | 第21-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·试剂和仪器 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-34页 |
| ·获得表达醛酮还原酶的基因 | 第23-26页 |
| ·克隆载体的构建 | 第26-28页 |
| ·醛酮还原酶表达菌株的构建 | 第28-30页 |
| ·醛酮还原酶的异源表达与纯化 | 第30-31页 |
| ·醛酮还原酶的酶学性质研究 | 第31-34页 |
| ·实验结果与讨论 | 第34-41页 |
| ·醛酮还原酶基因的克隆和表达菌株的构建 | 第34-35页 |
| ·醛酮还原酶的诱导表达及纯化 | 第35-36页 |
| ·酶学性质研究 | 第36-41页 |
| 3 醛酮还原酶催化不对称还原反应 | 第41-47页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·试剂与仪器 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·醛酮还原酶催化反应 | 第42页 |
| ·利用气相色谱和高效液相色谱检测催化反应 | 第42-43页 |
| ·实验结果与讨论 | 第43-47页 |
| ·标准品的GC和HPLC分析 | 第43-44页 |
| ·催化反应体系的底物浓度对反应的影响 | 第44-45页 |
| ·催化反应体系随反应时间的变化 | 第45-47页 |
| 4 辅酶再生循环反应制备(R)-CHBE | 第47-59页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·实验材料与试剂 | 第47-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第47-48页 |
| ·试剂和仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-52页 |
| ·共表达菌株的构建 | 第48-51页 |
| ·葡萄糖脱氢酶的表达及酶活测定 | 第51页 |
| ·两种辅酶再生循环体系催化制备CHBE | 第51-52页 |
| ·实验结果与讨论 | 第52-59页 |
| ·共表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·葡萄糖脱氢酶的表达及酶活测定 | 第53-54页 |
| ·辅酶再生循环催化制备CHBE | 第54-59页 |
| 5 醛酮还原酶基因定点突变 | 第59-72页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验材料与试剂 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-64页 |
| ·通过SOE-PCR方法进行定点突变 | 第59-62页 |
| ·突变片段与表达载体的连接 | 第62-63页 |
| ·突变重组子的蛋白表达 | 第63页 |
| ·突变酶的酶活及催化不对称还原反应 | 第63-64页 |
| ·实验结果与讨论 | 第64-72页 |
| ·氨基酸序列和结构分析确定突变位点 | 第64-65页 |
| ·用SOE-PCR方法进行定点突变 | 第65-68页 |
| ·突变表达载体的构建 | 第68页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第68-69页 |
| ·突变酶的酶活及催化不对称还原反应 | 第69-72页 |
| 6 结论与展望 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录 | 第81-82页 |
| 作者简历及硕士期间工作成果 | 第82页 |
