| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩写词表 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·生物可降解材料概述 | 第13页 |
| ·聚羟基脂肪酸酯(PHA)概述 | 第13-20页 |
| ·PHA的结构及分类 | 第14-15页 |
| ·微生物合成PHA的途径 | 第15-17页 |
| ·PHA的分析方法 | 第17-19页 |
| ·染色法 | 第18页 |
| ·气相色谱法 | 第18页 |
| ·高效液相色谱法 | 第18-19页 |
| ·核磁共振法 | 第19页 |
| ·PHA应用前景 | 第19-20页 |
| ·PHA作为生物可降解材料的应用 | 第19-20页 |
| ·PHA在医学和组织学上的应用 | 第20页 |
| ·P(3HB-co-4HB)简介 | 第20-26页 |
| ·P(3HB-co-4HB)结构、性质及功能 | 第20-23页 |
| ·P(3HB-co-4HB)生物合成途径 | 第23-26页 |
| ·本论文的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 实验部分 | 第27-55页 |
| ·实验材料 | 第27-32页 |
| ·菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·试剂及培养基 | 第28-31页 |
| ·常用试剂 | 第28页 |
| ·溶液配制 | 第28-29页 |
| ·培养基配方 | 第29-31页 |
| ·仪器和设备 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-41页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32-36页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·PCR克隆基因 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的回收 | 第33页 |
| ·质粒提取 | 第33-34页 |
| ·PCR片段和质粒的限制性内切酶酶切 | 第34-35页 |
| ·酶切产物的胶回收 | 第35页 |
| ·PCR片段与质粒的连接 | 第35页 |
| ·大肠杆菌普通感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第36页 |
| ·重组子的筛选与验证—两步法简单提质粒法 | 第36页 |
| ·Sad基因的敲除 | 第36-38页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·电转感受态细胞的制备及基因敲除 | 第37-38页 |
| ·重组子的筛选与验证—菌落PCR验证 | 第38页 |
| ·去除W3110/△sad菌株的kan抗性 | 第38页 |
| ·重组大肠杆菌产P(3HB-co-4HB)的发酵培养 | 第38-40页 |
| ·有氧发酵 | 第38-39页 |
| ·厌氧发酵 | 第39页 |
| ·两阶段发酵 | 第39-40页 |
| ·发酵产物的各项检测 | 第40-41页 |
| ·OD600的测定 | 第40页 |
| ·葡萄糖含量的测定 | 第40页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC)测定 | 第40页 |
| ·气相色谱法(GC)检测 | 第40-41页 |
| ·气相色谱-质谱联用(GC/MS)检测 | 第41页 |
| ·实验结果 | 第41-53页 |
| ·重组质粒pCCS4及pCS4的构建 | 第41-44页 |
| ·重组大肠杆菌厌氧发酵培养分析 | 第44-46页 |
| ·重组大肠杆菌发酵产物鉴定分析 | 第46-47页 |
| ·重组大肠杆菌的厌氧发酵优化 | 第47-50页 |
| ·敲除大肠杆菌W3110中的sad基因 | 第50-51页 |
| ·重组大肠杆菌有氧发酵培养分析 | 第51-53页 |
| ·小结与讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第62-63页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第63页 |