碱性蛋白酶产生菌筛选及其apr基因表达与酶学特性研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 缩写词中英文对照表 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 引言 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·试验材料 | 第22-27页 |
| ·主要酶及生化试剂 | 第22-23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23-24页 |
| ·试验菌株分离源 | 第24页 |
| ·试验发酵原料 | 第24页 |
| ·质粒和菌株 | 第24页 |
| ·主要溶液配制 | 第24-27页 |
| ·试验方法 | 第27-35页 |
| ·碱性蛋白酶产生菌的分离纯化 | 第27-28页 |
| ·碱性蛋白酶产生菌的鉴定 | 第28-29页 |
| ·碱性蛋白酶基因的克隆 | 第29页 |
| ·碱性蛋白酶基因重组质粒的构建 | 第29-31页 |
| ·重组质粒pET-apr-D2的表达 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白酶纯化和酶学性质的研究 | 第32-34页 |
| ·碱性蛋白酶基因和蛋白序列生物信息分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-61页 |
| ·碱性蛋白酶产生菌的分离纯化 | 第35页 |
| ·碱性蛋白酶产生菌的鉴定 | 第35-38页 |
| ·形态特征 | 第35-36页 |
| ·菌株16S rRNA基因序列和系统发育分析 | 第36-37页 |
| ·菌株生理生化特征 | 第37-38页 |
| ·碱性蛋白酶产生菌固态发酵效果的研究 | 第38-40页 |
| ·碱性蛋白酶基因重组质粒的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| ·碱性蛋白酶基因的克隆 | 第40页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pET-apr-D2的表达与鉴定 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白诱导表达条件及表达形式的确定 | 第42-44页 |
| ·最适诱导剂浓度的确定 | 第42页 |
| ·最适诱导时间的确定 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白His-apr-D2表达形式的鉴定 | 第43页 |
| ·表达产物活性分析 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白浓度的测定及细胞内外的分布情况 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白浓度的测定 | 第44页 |
| ·重组酶在细胞内外的分布情况 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白酶纯化和酶学性质的研究 | 第45-48页 |
| ·重组蛋白酶盐析特性 | 第45页 |
| ·重组蛋白酶的最适作用温度 | 第45页 |
| ·重组蛋白酶的热稳定性 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白酶的最适作用pH | 第46-47页 |
| ·重组蛋白酶的pH稳定性 | 第47页 |
| ·不同金属离子对重组蛋白酶酶活的影响 | 第47页 |
| ·不同化学试剂重组蛋白酶酶活的影响 | 第47-48页 |
| ·核酸序列分析 | 第48-50页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第48-49页 |
| ·核酸序列的碱基同源性分析 | 第49页 |
| ·开放阅读框(ORF)分析 | 第49-50页 |
| ·蛋白质结构预测及分析 | 第50-61页 |
| ·氨基酸序列的预测 | 第50页 |
| ·蛋白质一级结构分析 | 第50-53页 |
| ·蛋白质二级结构分析 | 第53-58页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| ·饲用碱性蛋白酶产生菌的筛选 | 第61页 |
| ·饲用碱性蛋白酶产生菌的多相鉴定 | 第61-62页 |
| ·固态发酵效果 | 第62页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第62-63页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌中诱导条件的选择 | 第63页 |
| ·重组蛋白生物学活性 | 第63-64页 |
| ·生物信息学分析碱性蛋白酶蛋白序列与结构 | 第64页 |
| ·重组碱性蛋白酶的分离纯化与酶的基本性质 | 第64-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75-76页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第76页 |
