| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1 锦鲤疱疹病毒的研究进展 | 第11-16页 |
| ·简介 | 第11页 |
| ·国内外流行现状 | 第11页 |
| ·分类和命名 | 第11-12页 |
| ·KHV形态结构和理化特征 | 第12页 |
| ·临床症状及病理特征 | 第12页 |
| ·分子生物学特性 | 第12-13页 |
| ·主要基因片段的免疫学特征 | 第13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| ·检测方法研究进展 | 第14-15页 |
| ·防治措施 | 第15-16页 |
| 2 鱼类核酸疫苗研究进展 | 第16-22页 |
| ·鱼类核酸疫苗的免疫机理 | 第16-18页 |
| ·核酸疫苗的构建 | 第18页 |
| ·鱼类核酸疫苗的免疫途径 | 第18-20页 |
| ·优化核酸疫苗免疫效果的方法 | 第20-21页 |
| ·核酸疫苗的安全性及应用前景 | 第21-22页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 pIRES-ORF25、pIRES-ORF81表达质粒的构建及体外表达 | 第23-38页 |
| 1 材料 | 第23页 |
| ·病毒与细胞 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-29页 |
| ·ORF25、ORF81基因扩增引物的设计 | 第23-24页 |
| ·KHV核酸的提取 | 第24页 |
| ·ORF25和ORF81基因的扩增 | 第24页 |
| ·ORF25和ORF81基因的克隆及鉴定 | 第24-26页 |
| ·ORF25和ORF81基因的生物信息学分析 | 第26页 |
| ·ORF25和ORF81基因核酸疫苗的构建 | 第26-28页 |
| ·重组质粒在MFC细胞中的表达 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-35页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·重组克隆质粒pMD18T-ORF25和pMD18T-ORF81的鉴定 | 第30-31页 |
| ·ORF25和ORF81基因的生物信息学分析 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pIRES-ORF25和pIRES-ORF81鉴定 | 第32-34页 |
| ·Western-blot检验蛋白表达结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| ·目的基因的选择 | 第35-36页 |
| ·真核表达载体的选择 | 第36页 |
| ·目的基因的生物信息学分析 | 第36页 |
| ·重组质粒的表达 | 第36页 |
| 5 小结 | 第36-38页 |
| 第三章 重组质粒pIRES-ORF25和pIRES-ORF81在鲤鱼体内诱导的免疫反应 | 第38-53页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·病毒、细胞和质粒 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-41页 |
| ·质粒的大量制备 | 第38页 |
| ·实验动物的选取 | 第38-39页 |
| ·重组质粒免疫鲤鱼 | 第39页 |
| ·重组质粒诱导鲤鱼免疫效果检测 | 第39-41页 |
| 3 结果 | 第41-50页 |
| ·实验用鲤鱼PCR检测 | 第41-42页 |
| ·鲤鱼抗体ELISA检测 | 第42-46页 |
| ·核酸疫苗免疫鲤鱼的中和抗体水平检测 | 第46-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| ·核酸疫苗接种途径和接种时间 | 第50-51页 |
| ·核酸疫苗接种次数和单次接种剂量 | 第51页 |
| ·不同核酸疫苗诱导免疫应答水平的比较 | 第51-52页 |
| ·核酸疫苗的安全性 | 第52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 个人简介 | 第64页 |
