| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-9页 |
| 缩略词 | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| ·植物冷驯化相关的分子调控机理 | 第12-15页 |
| ·低温信号的感知 | 第12-13页 |
| ·低温信号转导 | 第13页 |
| ·转录调控 | 第13-15页 |
| ·低温应答相关转录因子的研究进展 | 第15-21页 |
| ·转录因子的生物学功能和在植物抗逆境胁迫中的作用 | 第15页 |
| ·植物转录因子的结构 | 第15-17页 |
| ·顺式作用元件 | 第17页 |
| ·CBF 转录因子的结构特征. | 第17-18页 |
| ·CBF 转录因子的功能和在改良植物抗逆性方面的应用. | 第18-20页 |
| ·ICE1 正向调控 CBF 转录因子的表达 | 第20-21页 |
| ·茶树的抗寒性研究进展 | 第21-24页 |
| ·叶片的形态及解剖结构研究 | 第22页 |
| ·细胞膜的完整性及细胞活力研究 | 第22页 |
| ·保护性酶类研究 | 第22页 |
| ·细胞液浓度研究 | 第22-23页 |
| ·抗寒基因的筛选与鉴定 | 第23-24页 |
| 第二章 CsICE1 与 CsCBF1 的克隆和生物信息学分析 | 第24-41页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·植物材料 | 第24-25页 |
| ·菌株和载体 | 第25页 |
| ·试剂和培养基 | 第25页 |
| ·引物合成和测序 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·研究方法 | 第26-33页 |
| ·茶树总 RNA 提取 | 第26-27页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第27-28页 |
| ·CsICE1 部分保守片段的获得 | 第28-30页 |
| ·5’与 3’RACE 获取 CsICE1 全长 | 第30-32页 |
| ·CsCBF1 全长 cDNA 克隆 | 第32-33页 |
| ·序列比对及进化树构建 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-38页 |
| ·CsICE1 全长 cDNA 的克隆与鉴定 | 第33-34页 |
| ·CsICE1 的生物信息学分析 | 第34-36页 |
| ·CsCBF1 全长 cDNA 的克隆与鉴定 | 第36-37页 |
| ·CsCBF1 的生物信息学分析 | 第37-38页 |
| ·分析与讨论 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第三章 低温诱导条件下 CsICE1 与 CsCBF1 的表达分析 | 第41-50页 |
| ·前言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·植物材料的低温处理 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·引物的合成 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·总 RNA 提取 | 第42页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第42页 |
| ·cDNA 模板的稀释 | 第42-43页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第43-44页 |
| ·半定量 RT PCR | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·标准曲线与熔解曲线 | 第45-46页 |
| ·实时荧光定量 PCR 分析 CsICE1 和 CsCBF1 的冷诱导表达模式 | 第46-47页 |
| ·半定量 RT PCR 分析 CsICE1 和 CsCBF1 的冷诱导表达模式 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 CsICE1 与 CsCBF1 的原核表达与纯化 | 第50-76页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·载体和菌株 | 第50页 |
| ·主要生化试剂 | 第50-51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-60页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·质粒提抽 | 第52-53页 |
| ·CsICE1 和 CsCBF1 表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·含有重组子的表达宿主菌的筛选与保存 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第55页 |
| ·重组蛋白 SDS PAGE 分析 | 第55-56页 |
| ·蛋白表达条件优化 | 第56-57页 |
| ·诱导表达的融合蛋白可溶性分析 | 第57页 |
| ·柱层析纯化融合蛋白 | 第57-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-73页 |
| ·pET 32a ICE1 和 pET 32a CBF1 表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·两个目的基因表达宿主菌的 PCR 鉴定 | 第61页 |
| ·CsCBF1 融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第61-66页 |
| ·CsICE1 融合蛋白的诱导表达 | 第66-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| ·原核表达系统的选择 | 第73-74页 |
| ·表达载体的构建策略 | 第74页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 第五章 CsCBF1 与 CRT/DRE 顺式作用元件的结合分析 | 第76-98页 |
| ·前言 | 第76-78页 |
| ·实验材料 | 第78-79页 |
| ·主要生化试剂 | 第78-79页 |
| ·主要仪器 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-83页 |
| ·DNA 探针的制备 | 第79-80页 |
| ·CsCBF1 纯化蛋白的浓缩 | 第80-81页 |
| ·凝胶迁移分析 | 第81-83页 |
| ·结果与分析 | 第83-95页 |
| ·CsCBF1 纯化蛋白的浓缩 | 第83-84页 |
| ·天然 CsCBF1 蛋白的非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第84-89页 |
| ·CsCBF1 蛋白与 CRT/DRE 顺式作用元件的特异性结合 | 第89-95页 |
| ·讨论 | 第95-97页 |
| ·CsCBF1 蛋白的凝胶迁移分析 | 第95-96页 |
| ·影响 CsCBF1 蛋白与 DRE 探针结合的因素 | 第96-97页 |
| ·小结 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 作者简介 | 第108页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第108页 |
