| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| ·水稻稻瘟病相关研究 | 第13-14页 |
| ·作物抗病性研究 | 第14-16页 |
| ·抗病基因参与的抗病反应 | 第14-15页 |
| ·转录因子参与的抗病反应 | 第15-16页 |
| ·病程相关蛋白参与抗病反应 | 第16页 |
| ·水稻稻瘟病抗性基因的研究 | 第16-19页 |
| ·已克隆的稻瘟病抗性基因 | 第16-17页 |
| ·抗稻瘟病基因的研究 | 第17-19页 |
| ·RNAi的发现及其在植物中的应用 | 第19-22页 |
| ·RNAi的发现及其作用机制 | 第19-20页 |
| ·RNAi在植物中的应用 | 第20-22页 |
| ·RNAi在植物功能基因组中的应用 | 第20-21页 |
| ·RNAi在植物抗病研究中的应用 | 第21-22页 |
| 第二章 水稻Pi21基因RNAi转化载体的构建 | 第22-33页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·引物合成和PCR反应扩增目的片段 | 第22-23页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶纯化及回收 | 第23页 |
| ·连接反应 | 第23页 |
| ·大肠杆菌DH5 α热激感受态细胞的制备和热激转化 | 第23-24页 |
| ·重组子的验证及菌株的保存 | 第24-25页 |
| ·质粒的抽提 | 第25页 |
| ·DNA片段的限制性酶切反应 | 第25-26页 |
| ·载体的构建 | 第26-27页 |
| ·Pi21基因干涉表达载体阅读框的构建 | 第26页 |
| ·报告基因阅读框的构建 | 第26-27页 |
| ·用于农杆菌转化的水稻转化载体的组装 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-33页 |
| ·目的片段的扩增 | 第27-28页 |
| ·部分中间载体的构建与鉴定 | 第28-30页 |
| ·植物表达终载体的验证 | 第30-33页 |
| 第二章 水稻Pi21基因RNAi植株的抗稻瘟病研究 | 第33-54页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·水稻转化材料 | 第33页 |
| ·稻瘟菌转化材料 | 第33页 |
| ·试剂及仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-40页 |
| ·根癌农杆菌电激感受态细胞的制备及电激转化 | 第33-34页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第34-35页 |
| ·半定量RT-PCR和荧光实时定量RT-PCR | 第35-37页 |
| ·转基因苗的接菌实验 | 第37-38页 |
| ·T_1代GFP基因分离模式的χ2检验 | 第38页 |
| ·水稻叶片DNA的小量提取 | 第38页 |
| ·TAIL-PCR检测T-DNA的插入位点 | 第38-39页 |
| ·红色荧光蛋白基因转化稻瘟菌 | 第39-40页 |
| ·稻瘟菌原生质体的制备及转化 | 第39页 |
| ·转化子的筛选 | 第39页 |
| ·稻瘟菌菌丝DNA的提取 | 第39-40页 |
| ·转化子的PCR检测 | 第40页 |
| ·致病性分析 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-52页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第40-41页 |
| ·T_0代Pi21干涉植株的获得 | 第41页 |
| ·T_0代Pi21干涉植株的鉴定 | 第41-43页 |
| ·T_0代干涉植株的RT-PCR分析 | 第41-42页 |
| ·T_0代干涉植株的抗病性鉴定 | 第42-43页 |
| ·T_1代干涉植株的遗传分离 | 第43-44页 |
| ·T_1代干涉植株的鉴定 | 第44-45页 |
| ·T_1代干涉植株Pi21的实时定量RT-PCR | 第44页 |
| ·T_1代干涉植株的抗病鉴定 | 第44-45页 |
| ·Pi21干涉植株中OsWRKY,ABC transporter,PR基因在接菌条件下的表达差异 | 第45-46页 |
| ·水稻干涉植株T-DNA整合位点研究 | 第46-49页 |
| ·T-DNA旁侧序列的TAIL-PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·旁侧序列的PCR验证 | 第47-48页 |
| ·水稻干涉植株T-DNA边界序列的变异 | 第48-49页 |
| ·红色荧光蛋白基因转化稻瘟菌 | 第49-52页 |
| ·转化子的荧光检测 | 第49页 |
| ·转化子的PCR检测 | 第49-50页 |
| ·转化子致病性分析 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 转mCherry基因水稻的遗传分析及T-DNA整合位点的研究 | 第54-66页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第55页 |
| ·转mCherry基因水稻荧光检测 | 第55页 |
| ·T_1代mCherry基因分离模式的卡平方测验 | 第55页 |
| 4 2.4 转mCherry基因水稻mCherry和HPT基因的PCR检测 | 第55页 |
| ·转mCherry基因水稻T-DNA整合位点分析 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-65页 |
| ·转mCherry基因水稻T_0代植株的获得和荧光检测 | 第56页 |
| ·转mCherry基因T_1代水稻植株荧光检测及遗传分析 | 第56-60页 |
| ·转mCherry基因T_1代水稻植株的红色荧光检测 | 第56-57页 |
| ·转mCherry基因后代mCherry基因的遗传分离 | 第57-60页 |
| ·转mCherry基因株系T-DNA整合位点的分子检测 | 第60-64页 |
| ·转mCherry基因水稻后代植株的PCR检测 | 第60页 |
| ·转mCherry基因水稻T-DNA旁侧序列的TAIL-PCR扩增及PCR验证 | 第60-63页 |
| ·转mCherry基因水稻T-DNA边界序列的变异 | 第63-64页 |
| ·转mCherry基因水稻实时定量RT-PCR分析 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| 第五章 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第83-84页 |
