| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-27页 |
| ·哺乳动物的生物节律 | 第13-14页 |
| ·近日节律 | 第13页 |
| ·近七日节律 | 第13-14页 |
| ·近月节律 | 第14页 |
| ·近年节律 | 第14页 |
| ·生物节律的特征及机制 | 第14-15页 |
| ·生物节律的遗传性 | 第14页 |
| ·生物节律的温度补偿性 | 第14页 |
| ·生物节律产生的机制 | 第14-15页 |
| ·生物钟的定位及功能 | 第15-16页 |
| ·哺乳动物的生物钟基因 | 第16-17页 |
| ·差异表达基因的筛选 | 第17-19页 |
| ·差示反转录PCR | 第18页 |
| ·抑制性消减杂交技术 | 第18-19页 |
| ·基因芯片 | 第19页 |
| ·基因芯片数据分析 | 第19-20页 |
| ·基因结构分析 | 第20-23页 |
| ·基因序列分析 | 第21-22页 |
| ·调节序列分析 | 第22-23页 |
| ·蛋白质分子功能分析 | 第23页 |
| ·基因功能分析 | 第23-24页 |
| ·RNA干扰 | 第23-24页 |
| ·基因过表达 | 第24页 |
| ·乳腺上皮细胞培养 | 第24-25页 |
| ·研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-45页 |
| ·实验动物的选取 | 第27-28页 |
| ·乳腺组织的获取 | 第27-28页 |
| ·下丘脑视上核的获取 | 第28页 |
| ·乳腺组织RNA提取 | 第28-30页 |
| ·RNA提取的试剂、设备 | 第28页 |
| ·RNA提取的步骤 | 第28页 |
| ·RNA质量的检测 | 第28-30页 |
| ·紫外吸收测定法 | 第29页 |
| ·变性琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·基因芯片试验 | 第30-34页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·实验步骤 | 第30-34页 |
| ·基因芯片数据分析 | 第34-35页 |
| ·数据标准化 | 第34页 |
| ·GO分析 | 第34-35页 |
| ·Pathway分析 | 第35页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第35-37页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·反转录cDNA | 第36-37页 |
| ·Real Time PCR反应 | 第37页 |
| ·小鼠乳腺上皮细胞培养 | 第37-39页 |
| ·实验设备 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38-39页 |
| ·乳腺上皮细胞原代培养 | 第39页 |
| ·细胞鉴定 | 第39页 |
| ·视上核和乳腺组织Clock基因的表达 | 第39-40页 |
| ·钟基因在乳腺组织的表达 | 第40页 |
| ·乳腺组织不同发育阶段钟基因的表达 | 第40页 |
| ·泌乳期和退化期不同时点钟基因的表达 | 第40页 |
| ·Clock、Per1基因沉默检验基因功能 | 第40-43页 |
| ·Clock、Per1基因RNA干扰试验 | 第40-41页 |
| ·高效液相色谱检测Clock、Per1沉默对酪蛋白、乳糖合成的影响 | 第41-42页 |
| ·紫外吸收检测Clock、Per1基因沉默对甘油三脂合成的影响 | 第42-43页 |
| ·数据处理和统计分析 | 第43-45页 |
| 3 结果 | 第45-83页 |
| ·RNA提取质量检验结果 | 第45-46页 |
| ·基因芯片检测结果 | 第46-59页 |
| ·差异表达基因 | 第48-53页 |
| ·基因本体论 | 第53-56页 |
| ·信号通路 | 第56-59页 |
| ·荧光定量RT-PCR结果 | 第59-61页 |
| ·小鼠乳腺上皮细胞培养及鉴定 | 第61页 |
| ·视上核和乳腺组织中Clock的表达结果 | 第61-63页 |
| ·LD光照条件下Clock的昼夜节律表达 | 第62-63页 |
| ·DD光照条件下Clock的昼夜节律表达 | 第63页 |
| ·钟基因在乳腺组织的表达结果 | 第63-69页 |
| ·乳腺不同发育阶段钟基因的表达 | 第63-65页 |
| ·泌乳期和退化期不同时点钟基因的表达 | 第65-69页 |
| ·Clock、Per1基因功能检测 | 第69-83页 |
| ·Clock沉默检测结果 | 第69-76页 |
| ·Per1沉默检测结果 | 第76-83页 |
| 4 讨论 | 第83-87页 |
| ·乳腺组织差异表达基因谱 | 第83-84页 |
| ·Gene Ontology及Pathway分析 | 第84-85页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第85页 |
| ·乳腺组织钟基因的表达 | 第85页 |
| ·SCN和乳腺组织内Clock的表达 | 第85-86页 |
| ·Clock、Per1功能研究 | 第86-87页 |
| 5 结论 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 附录 | 第96-97页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第97页 |