| 第一部分 PGC-1α通过诱导UPase增加5‘-DFUR对癌细胞的敏感性 | 第1-44页 |
| 中文摘要 | 第5-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 前言 | 第7-9页 |
| 材料与方法 | 第9-33页 |
| 实验材料 | 第9-18页 |
| 1.菌株和细胞株 | 第9页 |
| 2.质粒载体 | 第9-13页 |
| 3.工具酶及分子量标准 | 第13页 |
| 4.试剂盒 | 第13-14页 |
| 5.试剂 | 第14-15页 |
| 6.主要仪器和设备 | 第15页 |
| 7.分析软件 | 第15页 |
| 8.实验所用引物 | 第15-18页 |
| 实验方法 | 第18-33页 |
| 1.mUPase启动子各片段和ERRE位点突变报告基因质粒载体的构建 | 第18-22页 |
| ·mUPase启动子各片段的扩增与连接 | 第18-19页 |
| ·pGL3-Basic-mutERRE mUPase(ERRE元件突变) | 第19-20页 |
| ·Inoue方法制备超级感受态细胞 | 第20页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第20-21页 |
| ·克隆检测 | 第21页 |
| ·小量抽提质粒 | 第21页 |
| ·大量提纯质粒 | 第21-22页 |
| 2.细胞培养 | 第22-25页 |
| ·细胞培养、复苏、传代、冻存 | 第22-23页 |
| ·细胞的瞬时转染 | 第23-24页 |
| ·重组腺病毒的构建与包装 | 第24-25页 |
| 3.双荧光素酶报告系统测定启动子活性 | 第25页 |
| 4.电泳迁移率实验(EMSA) | 第25-26页 |
| 5.RNA提取及cDNA的合成 | 第26-28页 |
| 6.Real-Time PCR实验 | 第28-29页 |
| 7.Western Blotting | 第29-31页 |
| 8.UPase酶活性测定 | 第31页 |
| 9.生长抑制检测和流式细胞仪分析 | 第31-32页 |
| 10.统计分析 | 第32-33页 |
| 实验结果 | 第33-39页 |
| 1.PGC-1α在乳腺癌和结肠癌细胞中诱导UPase表达 | 第33-34页 |
| 2.PGC-1α调控UPase转录是通过结合核受体 | 第34-35页 |
| 3.PGC-1α刺激UPase启动子活性是由ERR介导的 | 第35-36页 |
| 4.在癌细胞中,PGC-1α依赖的诱导UPase基因有ERRα介导 | 第36-37页 |
| 5.过表达PGC-1α是癌细胞对5’-DFUR的敏感性增加 | 第37-39页 |
| 讨论 | 第39-41页 |
| 小结 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 第二部分 Sirt3作为PGC-1α的新靶点在ROS和线粒体生成中发挥作用 | 第44-76页 |
| 中文摘要 | 第44-45页 |
| 英文摘要 | 第45-46页 |
| 前言 | 第46-49页 |
| 材料与方法 | 第49-58页 |
| 实验材料 | 第49-50页 |
| 实验方法 | 第50-58页 |
| 1.mSirt3启动子各片段和ERRE位点突变报告基因质粒载体的构建 | 第50页 |
| 2.细胞培养 | 第50-53页 |
| 3.双荧光素酶报告系统测定启动子活性 | 第53页 |
| 4.电泳迁移率实验 | 第53页 |
| 5.染色质免疫共沉淀实验 | 第53-56页 |
| 6.Real-Time PCR实验 | 第56页 |
| 7.Western Blotting | 第56-57页 |
| 8.细胞内超氧分子水平的测定 | 第57页 |
| 9.线粒体DNA拷贝数检测 | 第57-58页 |
| 实验结果 | 第58-69页 |
| 1.PGC-1α诱导小鼠Sirt3基因的表达 | 第58-60页 |
| 2.PGC-1α刺激Sirt3启动子的作用是通过位于启动子区-407bp到-399bp处的ERRE | 第60-62页 |
| 3.ERRα能结合到Sirt3启动子区且参与PGC-1α诱导Sirt3基因表达 | 第62-63页 |
| 4.敲低Sirt3能抑制PGC-1α诱导的线粒体基因表达 | 第63-65页 |
| 5.SIRT3参与PGC-1α在细胞内ROS水平的线粒体生成中的作用 | 第65-69页 |
| 讨论 | 第69-71页 |
| 小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附录 | 第76-78页 |
| 综述 | 第78-88页 |
| References | 第85-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 作者简介 | 第89-90页 |
| 在读期间所发表的研究性论文 | 第90-91页 |
