| 提要 | 第1-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-20页 |
| ·概述 | 第7-10页 |
| ·溶菌酶研究进展 | 第10-15页 |
| ·核肽酶简介 | 第15-17页 |
| ·研究内容及意义 | 第17-20页 |
| 第二章 实验材料 | 第20-31页 |
| ·仪器与试剂 | 第20-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第30-31页 |
| 第三章 “外显子嫁接”产生“双活性部位”溶菌酶（TAL） | 第31-72页 |
| 第一节 TAL基因的构建与表达 | 第31-55页 |
| ·实验材料及原理 | 第31-32页 |
| ·TAL基因的构建 | 第32-39页 |
| ·TAL基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9 | 第39-41页 |
| ·TAL基因在毕赤酵母中的表达 | 第41-44页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第44-45页 |
| ·TAL 的活性分析 | 第45-46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-55页 |
| 第二节 TAL 双活性部位的确定 | 第55-64页 |
| ·实验材料及原理 | 第55页 |
| ·TAL 突变体的构建 | 第55-57页 |
| ·TAL 突变体基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9 | 第57页 |
| ·TAL 突变体在毕赤酵母中的表达 | 第57-58页 |
| ·TAL 突变体的纯化 | 第58页 |
| ·TAL 突变体活性分析 | 第58页 |
| ·实验结果与讨论 | 第58-64页 |
| 第三节 TAL 酶学性质及结构与功能研究 | 第64-72页 |
| ·TAL 的酶学性质 | 第64页 |
| ·TAL 结构与功能研究 | 第64-65页 |
| ·实验结果与讨论 | 第65-72页 |
| 第四章 体外突环（loop）嫁接获得“双功能”酶（HLY-RD，核肽酶基因嫁接入溶菌酶） | 第72-95页 |
| 第一节 HLY-RD 基因的构建与表达 | 第72-86页 |
| ·实验材料及原理 | 第72-73页 |
| ·HLY-RD 基因的构建 | 第73-75页 |
| ·HLY-RD基因克隆到大肠杆菌表达载体pET21a(+) | 第75-77页 |
| ·HLY-RD基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第77-78页 |
| ·包涵体的变性复性 | 第78页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第78-79页 |
| ·实验结果与讨论 | 第79-86页 |
| 第二节 HLY-RD的酶学性质及结构与功能的分析 | 第86-95页 |
| ·HLY-RD 的酶学性质 | 第86-88页 |
| ·HLY-RD 结构与功能研究 | 第88页 |
| ·实验结果与讨论 | 第88-95页 |
| 第五章 关键催化氨基酸置入现有突环提高溶菌酶活性(NL_2) | 第95-113页 |
| 第一节 “双活性部位”溶菌酶突变体NLM_1和NLM_2基因的构建与表达 | 第95-105页 |
| ·实验材料及原理 | 第95-98页 |
| ·“双活性部位”溶菌酶突变体NLM_1和NLM_2基因的构建 | 第98-99页 |
| ·NLM_1和NLM_2基因在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第99-100页 |
| ·NLM_1和NLM_2活性分析 | 第100页 |
| ·实验结果与讨论 | 第100-105页 |
| 第二节 “双活性部位”溶菌酶NL_2基因的构建与表达 | 第105-108页 |
| ·NL_2基因的构建 | 第105页 |
| ·NL_2基因在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第105页 |
| ·实验结果与讨论 | 第105-108页 |
| 第三节 NL_2的酶学性质及结构与功能分析 | 第108-113页 |
| ·NL_2的酶学性质 | 第108页 |
| ·NL_2结构与功能研究 | 第108页 |
| ·实验结果与讨论 | 第108-113页 |
| 第六章 结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 攻读博士期间发表及待发表的论文 | 第125-126页 |
| 摘要 | 第126-130页 |
| ABSTRACT | 第130-135页 |
