| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 1 引言 | 第14-35页 |
| ·国内外牛皮蝇的研究历史 | 第14-15页 |
| ·国外研究历史 | 第14-15页 |
| ·国内研究历史 | 第15页 |
| ·病原种类 | 第15-16页 |
| ·牛皮蝇的主要生物学特性 | 第16-18页 |
| ·牛皮蝇的生活史 | 第16页 |
| ·牛皮蝇幼虫在牛体内的移行规律 | 第16-17页 |
| ·牛皮蝇的活动规律 | 第17-18页 |
| ·牛皮蝇蛆病的地理分布及危害 | 第18-19页 |
| ·牛皮蝇蛆病的地理分布 | 第18页 |
| ·牛皮蝇及牛皮蝇蛆病的危害 | 第18-19页 |
| ·国内外牛皮蝇蛆病防治研究进展 | 第19-23页 |
| ·药物防治 | 第19-21页 |
| ·疫苗的研究进展 | 第21-23页 |
| ·牛皮蝇蛆病诊断研究进展 | 第23-25页 |
| ·临床检查 | 第23页 |
| ·血清学诊断研究进展 | 第23-25页 |
| ·包涵体蛋白体外复性研究 | 第25-33页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第25页 |
| ·包涵体蛋白的形成机制 | 第25-26页 |
| ·包涵体的分离，洗涤和溶解 | 第26-27页 |
| ·蛋白质折叠复性的机理 | 第27-28页 |
| ·蛋白质体外重折叠复性的方法 | 第28-33页 |
| ·本研究的主要目的和意义 | 第33-35页 |
| 2 试验研究一 Hypodermins A,B,C 基因cDNA 的克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第35-69页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·实验虫体 | 第35页 |
| ·菌株与质粒载体 | 第35-36页 |
| ·主要的酶和试剂 | 第36页 |
| ·仪器与设备 | 第36页 |
| ·试剂配制 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-47页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·纹皮蝇幼虫总RNA 的提取 | 第37页 |
| ·HA，HB 和HC 基因的 RT-PCR 扩增 | 第37-39页 |
| ·HA，HB 和HC 基因的克隆 | 第39-42页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第42-45页 |
| ·重组表达菌诱导表达条件的优化 | 第45-47页 |
| ·实验结果 | 第47-65页 |
| ·纹皮蝇幼虫总RNA 的提取 | 第47页 |
| ·HA，HB 和HC 基因 RT-PCR 扩增 | 第47-48页 |
| ·重组克隆菌的筛选 | 第48-51页 |
| ·重组表达菌的筛选 | 第51-53页 |
| ·核苷酸序列测定与分析 | 第53-60页 |
| ·重组表达菌诱导表达条件的优化 | 第60-64页 |
| ·重组蛋白的 Western Blotting 检测 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-69页 |
| ·序列分析 | 第66页 |
| ·HA，HB，HC 基因cDNA 在大肠杆菌中的表达 | 第66-68页 |
| ·Western blotting 检测 | 第68-69页 |
| 3 试验研究二 重组蛋白的复性及纯化 | 第69-80页 |
| ·实验材料 | 第69-70页 |
| ·表达菌株 | 第69页 |
| ·主要的酶和试剂 | 第69页 |
| ·仪器与设备 | 第69-70页 |
| ·溶液的配制 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-72页 |
| ·重组蛋白包涵体的制备 | 第70-71页 |
| ·重组蛋白透析复性 | 第71页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第71-72页 |
| ·重组蛋白 SEC 柱上复性及纯化 | 第72页 |
| ·实验结果 | 第72-76页 |
| ·重组蛋白包涵体的制备 | 第72页 |
| ·重组蛋白透析复性及纯化 | 第72-74页 |
| ·重组蛋白 SEC 柱上复性及纯化 | 第74-76页 |
| ·讨论 | 第76-80页 |
| ·重组蛋白包涵体的制备 | 第77页 |
| ·重组蛋白透析复性及纯化 | 第77-78页 |
| ·重组蛋白 SEC 柱上复性及纯化 | 第78-80页 |
| 4 试验研究三 牛皮蝇蛆病间接 ELISA 诊断方法的建立 | 第80-91页 |
| ·实验材料 | 第80页 |
| ·实验虫体 | 第80页 |
| ·实验仪器 | 第80页 |
| ·实验试剂 | 第80页 |
| ·试剂的配制 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-82页 |
| ·抗原的制备及血清的采集 | 第80-81页 |
| ·间接 ELISA 的实验程序 | 第81页 |
| ·间接 ELISA 最佳反应条件的确定 | 第81页 |
| ·判定点的确定 | 第81页 |
| ·特异性和敏感性的测定 | 第81-82页 |
| ·抗原阻断试验 | 第82页 |
| ·重复性试验 | 第82页 |
| ·田间血清检测 | 第82页 |
| ·阳性符合率检测 | 第82页 |
| ·实验结果 | 第82-89页 |
| ·虫体粗蛋白浓度测定 | 第82页 |
| ·间接 ELISA 最佳反应条件的确定 | 第82-85页 |
| ·判定点确立 | 第85-87页 |
| ·特异性和敏感性的测定 | 第87页 |
| ·抗原阻断实验 | 第87-88页 |
| ·重复性试验 | 第88页 |
| ·田间血清检测 | 第88页 |
| ·阳性符合率检测 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-91页 |
| 5 结论与展望 | 第91-93页 |
| ·结论 | 第91页 |
| ·展望 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-105页 |
| 附录 | 第105-115页 |
| 作者简介 | 第115页 |
