| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-28页 |
| ·糖尿病 | 第9-10页 |
| ·胰岛素 | 第10-26页 |
| ·胰岛素的结构与性质 | 第10-12页 |
| ·胰岛素的体内合成 | 第12-13页 |
| ·胰岛素的生理作用 | 第13-14页 |
| ·胰岛素的分类 | 第14-16页 |
| ·胰岛素的制备 | 第16-17页 |
| ·胰岛素的发展历史 | 第17-18页 |
| ·重组人胰岛素的研究 | 第18-23页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第23-26页 |
| ·本课题的研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 基因工程菌的构建 | 第28-46页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·人胰岛素原DNA 片段的制备 | 第29-32页 |
| ·胶回收目的基因片段与pMD 18-T Vector 的连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-34页 |
| ·克隆菌的转化 | 第34页 |
| ·重组子的鉴定 | 第34-36页 |
| ·表达质粒hPI-pET32-a 的构建 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-44页 |
| ·目的基因片段的制备 | 第37页 |
| ·重组子hPI-T 的鉴定 | 第37-40页 |
| ·表达质粒hPI-P 的构建 | 第40-44页 |
| ·分析与讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 工程菌的发酵及重组蛋白的鉴定 | 第46-59页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-53页 |
| ·表达菌的转化和筛选 | 第46-47页 |
| ·工程菌发酵条件的优化 | 第47页 |
| ·菌体收获 | 第47页 |
| ·破菌 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE 电泳检测 | 第48-50页 |
| ·蛋白的免疫印迹(Western Blotting)分析 | 第50-51页 |
| ·流加发酵 | 第51-53页 |
| ·结果 | 第53-56页 |
| ·种子菌的筛选 | 第53页 |
| ·摇瓶发酵的优化 | 第53-55页 |
| ·Western Blotting 分析 | 第55页 |
| ·流加发酵 | 第55-56页 |
| ·分析与讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 目的蛋白的纯化和酶切 | 第59-68页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-60页 |
| ·工程菌的收集 | 第59页 |
| ·破菌实验 | 第59-60页 |
| ·纯化 | 第60-61页 |
| ·固定化金属离子亲和层析 | 第60页 |
| ·离子交换层析 | 第60-61页 |
| ·凝胶层析 | 第61页 |
| ·二喹啉甲酸（BCA）检测蛋白浓度[66] | 第61页 |
| ·酶切实验及重组人胰岛素的分离纯化 | 第61-62页 |
| ·结果 | 第62-65页 |
| ·破菌实验 | 第62-63页 |
| ·纯化实验 | 第63-64页 |
| ·酶切实验结果 | 第64-65页 |
| ·胰岛素活性测定 | 第65页 |
| ·讨论与分析 | 第65-68页 |
| ·破菌条件的探索 | 第65-66页 |
| ·蛋白纯化 | 第66-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第76页 |