| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 前言 | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-20页 |
| ·微生物脂肪酶研究现状 | 第8-12页 |
| ·微生物脂肪酶概述 | 第8-9页 |
| ·枯草芽孢杆菌的脂肪酶 | 第9-10页 |
| ·lipA基因的表达及其调控 | 第10-12页 |
| ·CcpA转录调控子在枯草芽孢杆菌的碳代谢中的作用 | 第12-15页 |
| ·CcpA调节功能 | 第12-13页 |
| ·葡萄糖对EMP途径的影响 | 第13-14页 |
| ·葡萄糖对TCA循环的影响 | 第14页 |
| ·葡萄糖对溢流代谢的影响 | 第14页 |
| ·葡萄糖对PP途径的影响 | 第14-15页 |
| ·CcpA缺陷的生理效应 | 第15页 |
| ·枯草芽孢杆菌的胞外蛋白酶 | 第15-16页 |
| ·枯草芽孢杆菌的基因工程 | 第16-18页 |
| ·同源重组 | 第16-17页 |
| ·RecA蛋白所介导的同源重组 | 第17-18页 |
| ·基因敲除 | 第18页 |
| ·本文研究目的与研究意义 | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-29页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·菌种和质粒 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要药品 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
| ·枯草芽孢杆菌染色体DNA提取 | 第25页 |
| ·DNA的纯化和浓缩 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第25-26页 |
| ·质粒的小规模提取 | 第26页 |
| ·B.subtilis的Spizizen转化 | 第26页 |
| ·引物及PCR反应 | 第26-28页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-49页 |
| ·B.subtilisDB104 的 lipA 基因敲除 | 第29-36页 |
| ·lipA基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pUC18-lipA的构建 | 第31-33页 |
| ·氯霉素抗性基因的 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pUC18- lipA::Cm~r的构建 | 第34页 |
| ·D8104 菌株lipA基因的敲除及验证 | 第34-35页 |
| ·B.subtilis TZ10 菌株在脂肪中性红平板上的表型现象 | 第35-36页 |
| ·B.subtilis TZ10 的ccpA基因敲除 | 第36-40页 |
| ·ccpA基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pUC18-ccpA的构建 | 第37-38页 |
| ·红霉素抗性基因的PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pUC18-ccpA::Em~r的构建 | 第39页 |
| ·B.subtilisTZ 10 菌株 ccpA 基因敲除及转化子筛选 | 第39-40页 |
| ·B.subtilis TZ10、TZ20 的recA基因敲除 | 第40-49页 |
| ·recA基因的PCR扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒 pUC18-recA 的构建 | 第42-43页 |
| ·红霉素抗性基因（erm）的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pUC18-recA::Em~r的构建 | 第44页 |
| ·卡那霉素抗性基因（Km~r）的PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pUC18-recA::Kmr的构建 | 第45-46页 |
| ·B.subtilisTZ10 菌株recA基因敲除及转化子筛选 | 第46-47页 |
| ·B.subtilisTZ20 菌株recA基因敲除及转化子筛选 | 第47-48页 |
| ·B.Subtilis TZ76 作为受体菌的生长表现 | 第48-49页 |
| 第四章 结论与展望 | 第49-50页 |
| ·主要结论 | 第49页 |
| ·展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
