| 目录 | 第1-8页 |
| 英文缩写词表 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 第一部分 神经干细胞分离、培养和鉴定以及低氧浓度测定 | 第19-26页 |
| 一、实验材料 | 第19-20页 |
| 1.主要仪器 | 第19页 |
| 2.主要试剂 | 第19页 |
| 3.实验取材 | 第19-20页 |
| 二、实验方法 | 第20-21页 |
| 1.神经干细胞分离培养 | 第20页 |
| 2.免疫组化鉴定神经干细胞 | 第20页 |
| 3.实验分组 | 第20页 |
| 4.血气分析仪测定细胞培养上清中的PO_2 | 第20页 |
| 5.生化分析仪测定细胞培养上清中的乳酸浓度 | 第20-21页 |
| 6.统计分析 | 第21页 |
| 三、实验结果 | 第21-23页 |
| 1.神经干细胞培养 | 第21页 |
| 2.神经干细胞鉴定结果 | 第21-22页 |
| 3.细胞培养上清中的PO_2 | 第22页 |
| 4.细胞培养上清中的乳酸浓度 | 第22-23页 |
| 四、讨论 | 第23-25页 |
| 结论 | 第25-26页 |
| 第二部分 低氧对神经干细胞增殖的影响及HIF-1的作用 | 第26-53页 |
| 一、实验材料 | 第26-27页 |
| 1.主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.主要试剂 | 第27页 |
| 3.实验取材 | 第27页 |
| 二、实验方法 | 第27-34页 |
| 1.神经干细胞分离培养 | 第27页 |
| 2.实验分组及实验流程 | 第27-28页 |
| 3.神经球记数法 | 第28页 |
| 4.流式细胞术测定增殖指数 | 第28页 |
| 5.免疫组化检测Brdu阳性细胞数 | 第28页 |
| 6.细胞记数法 | 第28-29页 |
| 7.RT-PCR检测HIF-1α mRNA的表达 | 第29-30页 |
| 8.Western blot检测HIF-1α蛋白的表达 | 第30-32页 |
| 9.HIF-1α腺病毒载体构建 | 第32-33页 |
| 10.腺病毒感染神经干细胞 | 第33页 |
| 11.HIF-1α的RNAi载体构建 | 第33-34页 |
| 12.RNAi载体转染神经干细胞 | 第34页 |
| 13.统计分析 | 第34页 |
| 三、实验结果 | 第34-49页 |
| 1.低氧对神经干细胞增殖的影响 | 第34-37页 |
| ① 神经球记数结果 | 第34页 |
| ② 增殖指数测定结果 | 第34页 |
| ③ Brdu阳性细胞数 | 第34-37页 |
| ·％低氧过程中神经干细胞内HIF-1α的表达变化 | 第37-39页 |
| ① HIF-1α mRNA的表达变化 | 第37-38页 |
| ② HIF-1α蛋白的表达变化 | 第38-39页 |
| 3.过表达HIF-1α对神经干细胞增殖的影响 | 第39-43页 |
| ① 腺病毒载体制备 | 第39-40页 |
| ② 神经干细胞腺病毒感染效果评价 | 第40-41页 |
| ③ 腺病毒感染后HIF-1α蛋白表达检测结果 | 第41-42页 |
| ④ 神经干细胞过表达HIF-1α后增殖指数测定结果 | 第42-43页 |
| ⑤ 神经干细胞过表达HIF-1α后细胞记数结果 | 第43页 |
| 4.抑制HIF-1α表达对神经干细胞增殖的影响 | 第43-49页 |
| ① RNAi载体制备 | 第43-45页 |
| ② RNAi效果评价 | 第45-47页 |
| ③ 转染RNAi质粒后神经干细胞HIF-1α蛋白表达检测结果 | 第47-48页 |
| ④ 转染RNAi质粒后增殖指数测定结果 | 第48-49页 |
| 四、讨论 | 第49-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 第三部分 低氧对神经干细胞分化的影响及HIF-1的作用 | 第53-71页 |
| 一、实验材料 | 第53-54页 |
| 1.主要仪器 | 第53页 |
| 2.主要试剂 | 第53-54页 |
| 3.实验取材 | 第54页 |
| 二、实验方法 | 第54-58页 |
| 1.神经干细胞分离培养 | 第54页 |
| 2.实验分组及实验流程 | 第54-55页 |
| 3.免疫组化检测神经元及胶质细胞标志性蛋白 | 第55-56页 |
| 4.流式细胞术测定FITC标记的TH阳性细胞 | 第56页 |
| 5.高效液相色谱检测培养上清DA含量 | 第56-57页 |
| 6.RT-PCR检测HIF-1α mRNA的表达 | 第57页 |
| 7.Western blot检测HIF-1α蛋白的表达 | 第57页 |
| 8.流式细胞术测定GFP和PE双标记TH阳性细胞 | 第57-58页 |
| 9.统计分析 | 第58页 |
| 三、实验结果 | 第58-67页 |
| 1.低氧对神经干细胞分化方向的影响 | 第58-62页 |
| ① 向神经元和胶质细胞方向的分化结果 | 第58页 |
| ② 向TH阳性神经元方向的分化结果 | 第58-61页 |
| ③ 培养上清DA含量检测结果 | 第61-62页 |
| ·％低氧诱导过程中神经前体细胞内HIF-1α的表达变化 | 第62-63页 |
| ① HIF-1α mRNA的表达变化 | 第62页 |
| ② HIF-1α蛋白的表达变化 | 第62-63页 |
| 3.过表达HIF-1α对神经干细胞分化方向的影响 | 第63-67页 |
| ① 分化神经干细胞腺病毒感染效果评价 | 第63页 |
| ② 腺病毒感染后HIF-1α蛋白表达检测结果 | 第63-64页 |
| ③ 过表达HIF-1α后TH阳性细胞比例 | 第64-65页 |
| ④ 过表达HIF-1α后培养上清DA含量测定结果 | 第65-67页 |
| 四、讨论 | 第67-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 文献综述 | 第78-83页 |
| 文章(一) | 第83-89页 |
| 文章(二) | 第89-102页 |
| 博士期间发表和待发表的文章、学术会议及基金申请 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
