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猪传染性胃肠炎病毒的分子诊断与免疫研究

第一章 绪言第1-25页
   ·研究背景第13-19页
     ·TGEV的形态结构第13-14页
     ·TGEV分子生物学特性第14-19页
   ·国内外研究现状第19-24页
     ·TGEV的诊断第19-21页
     ·猪传染性胃肠炎疫苗第21-23页
     ·腺病毒活载体疫苗第23-24页
   ·研究目的及意义第24-25页
第二章 猪传染性胃肠炎病毒的分离与鉴定第25-38页
   ·材料与方法第25-32页
     ·菌株与质粒第25页
     ·主要试剂第25页
     ·主要仪器与设备第25-26页
     ·病毒分离与培养第26页
     ·病毒TCID_(50)的测定第26-27页
     ·中和试验(固定血清—稀释病毒法)第27页
     ·病毒电镜观察第27页
     ·RT-PCR诊断第27-32页
   ·结果第32-35页
     ·细胞病变的观察第32-33页
     ·TGEV TS株病毒的TCID_(50)第33页
     ·中和试验结果第33页
     ·TGEV电镜观察结果第33-34页
     ·PCR产物的电泳结果第34页
     ·重组质粒中目的基因PCR鉴定结果第34-35页
     ·目的基因的序列分析第35页
   ·讨论第35-38页
第三章 TGEV和PEDV的双重RT-PCR鉴别诊断第38-48页
   ·材料与方法第38-42页
     ·菌株与质粒第38页
     ·主要试剂第38-39页
     ·主要仪器与设备第39页
     ·病毒样品的处理第39页
     ·目的基因的双重RT-PCR扩增第39-41页
     ·目的基因的克隆及鉴定第41页
     ·基因序列及由其推导的氨基酸序列分析第41页
     ·PCR特异性试验第41-42页
     ·敏感性试验第42页
     ·田间试验第42页
   ·结果第42-46页
     ·双重PCR产物的电泳结果第42页
     ·重组质粒中目的基因PCR鉴定结果第42-43页
     ·TGEV TS株RT-PCR产物序列分析第43-44页
     ·PEDV QH株RT-PCR产物序列分析第44-45页
     ·双重PCR特异性试验第45页
     ·敏感性试验结果第45-46页
     ·田间试验结果第46页
   ·讨论第46-48页
第四章 TGEV S基因重组腺病毒的构建第48-72页
   ·材料与方法第49-60页
     ·技术路线第49-50页
     ·主要材料第50页
     ·主要试剂第50页
     ·主要仪器与设备第50页
     ·S基因的克隆第50-54页
     ·重组腺病毒穿梭载体的构建第54-56页
     ·含S基因重组腺病毒载体的构建第56-58页
     ·含S基因复制缺陷型重组腺病毒的获得第58-59页
     ·重组腺病毒电镜观察第59页
     ·重组腺病毒TCID50测定第59-60页
     ·重组腺病毒的稳定性检测第60页
   ·结果第60-68页
     ·S基因PCR产物的电泳结果第60页
     ·S基因PCR鉴定结果第60-61页
     ·S基因的序列分析第61页
     ·重组质粒pMD18-Ts/S中S基因的鉴定第61-63页
     ·重组腺病毒穿梭质粒的PCR及酶切鉴定第63页
     ·复制缺陷型腺病毒质粒的鉴定第63-65页
     ·重组腺病毒的收获及鉴定第65-66页
     ·重组腺病毒电镜观察结果第66-67页
     ·重组腺病毒空斑纯化及TCID_(50)测定结果第67页
     ·重组腺病毒稳定性检测结果第67-68页
   ·讨论第68-72页
第五章 猪传染性胃肠炎重组腺病毒的动物免疫试验第72-81页
   ·材料与方法第72-76页
     ·病毒及实验动物第72-73页
     ·主要试剂第73页
     ·主要仪器及设备第73页
     ·重组腺病毒的准备第73页
     ·复制缺陷型重组腺病毒rAd-S对仔猪的免疫效果研究第73-74页
     ·特异性抗体对乳猪的保护力试验第74-75页
     ·乳汁免疫对乳猪的保护力试验第75-76页
   ·结果第76-78页
     ·仔猪体内rAd-S特异性抗体检测第76-77页
     ·仔猪攻毒试验第77页
     ·特异性抗体对乳猪的保护力第77-78页
     ·母猪的血清特异性抗体第78页
     ·乳汁免疫对乳猪的保护力第78页
   ·讨论第78-81页
第六章 结论第81-82页
参考文献第82-92页
附录第92-111页
 附录1 TGEV Sp基因片段的序列比较第92-96页
 附录2 TGEV N基因的序列比较第96-99页
 附录3 PEDV M基因的序列比较第99-101页
 附录4 TGEV S基因的序列比较第101-111页
致谢第111-112页
作者简历第112页

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