| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 一、前言 | 第12-20页 |
| 1、甘蔗花叶病和甘蔗花叶病毒的研究背景与现状 | 第12-17页 |
| ·甘蔗花叶病的发生及危害 | 第12-13页 |
| ·甘蔗花叶病毒 | 第13-16页 |
| ·甘蔗花叶病毒的归属和特征 | 第13-14页 |
| ·甘蔗花叶病毒亚组分类 | 第14页 |
| ·我国甘蔗花叶病毒的株系和分化 | 第14-16页 |
| ·甘蔗抗花叶病育种研究现状 | 第16-17页 |
| 2、甘蔗抗病毒基因工程 | 第17-18页 |
| ·甘蔗抗病毒基因工程的主要策略 | 第18页 |
| ·基于外壳蛋白基因 | 第18页 |
| ·其它方面 | 第18页 |
| 3、甘蔗花叶病毒E株系的抗体制备与应用现状 | 第18-19页 |
| 4、本项目研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 二、材料和方法 | 第20-34页 |
| 1、实验材料 | 第20-21页 |
| ·供试的菌株与质粒 | 第20页 |
| ·引物 | 第20页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第20页 |
| ·其它试剂 | 第20-21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| 2、实验方法 | 第21-34页 |
| ·基本分子生物学方法 | 第21页 |
| ·甘蔗花叶病毒外壳蛋白基因的扩增和回收 | 第21-23页 |
| ·质粒pNUSCP少量提取及纯化 | 第21-22页 |
| ·ScMV-E CP基因部分片段PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·目的片段回收和纯化 | 第23页 |
| ·ScMV-E CP基因的亚克隆 | 第23-25页 |
| ·目的片段与克隆载体连接 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·转化大肠杆菌DH5a | 第24页 |
| ·拟转化子的鉴定 | 第24-25页 |
| ·ScMV-E CP基因的原核表达载体构建 | 第25-27页 |
| ·pMD18-T-CP质粒的双酶切和目的片段回收 | 第25-26页 |
| ·原核表达载体pEi29a(+)的提取及纯化 | 第26页 |
| ·原核表达载体pET29a(+)的双酶切和回收 | 第26页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第26页 |
| ·转化大肠杆菌DH5a | 第26页 |
| ·原核表达载体拟重组质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| ·ScJIF-E CP基因的原核表达 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的感受态制备 | 第27页 |
| ·转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第27页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第27页 |
| ·在不同诱导时间下目的蛋白的表达量 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳检测目的蛋白 | 第28-30页 |
| ·表达菌的裂解 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·硝酸银染色 | 第29-30页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·天然条件下样品的制备 | 第30页 |
| ·柱的准备 | 第30-31页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·多克隆抗体制备与保存 | 第31-32页 |
| ·ScMV-E CP抗血清效价测定 | 第32页 |
| ·抗血清特异性评价 | 第32-34页 |
| 三、结果和分析 | 第34-47页 |
| 1、甘蔗花叶病毒外壳蛋白基因(SCMV—E CP)的扩增和回收 | 第34-35页 |
| ·目的片段ScMV-E CP的PCR扩增结果 | 第34页 |
| ·目的片段回收纯化的结果 | 第34-35页 |
| 2、ScMV-E CP基因亚克隆转化子的鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·PER鉴定亚克隆拟转化子 | 第35页 |
| ·双酶切鉴定亚克隆拟转化子 | 第35-36页 |
| 3、ScMV-E CP基因的原核表达载体构建 | 第36-41页 |
| ·质粒pMD18-T-CP双酶切和目的片段回收结果 | 第36-37页 |
| ·表达载体pET29a(+)的酶切和目的片段回收结果 | 第37页 |
| ·原核表达拟重组质粒pET29a-CP与分子鉴定结果 | 第37-39页 |
| ·序列测定及分析结果 | 第39-41页 |
| 4、ScMV-E CP基因的原核表达 | 第41-43页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳检测目的蛋白 | 第41-42页 |
| ·诱导时间对目的蛋白的表达效应 | 第42-43页 |
| 5、纯化目的蛋白的检测 | 第43-45页 |
| 6、多克隆抗体 | 第45-47页 |
| ·ScMV-E CP抗血清效价测定结果 | 第45页 |
| ·抗血清特异性评价结果 | 第45-47页 |
| 四、讨论 | 第47-53页 |
| 1、关于甘蔗花叶病毒外壳蛋白基因(ScMV-E CP)的扩增和回收 | 第47页 |
| 2、关于ScMV-CP基因克隆 | 第47-48页 |
| 3、关于原核表达载体的构建和表达 | 第48-49页 |
| 4、关于目的蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 5、关于多克隆抗体 | 第50-51页 |
| 6、本研究的创新以及进一步研究工作计划 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录1 | 第58-60页 |
| 附录2 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
