首页--农业科学论文--畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂论文--动物医学(兽医学)论文--兽医基础科学论文--家畜微生物学(兽医病原微生物学)论文--家畜病毒学论文

广西猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离及E基因的原核表达

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-10页
前言第10-35页
 一、病原学第10-18页
  1、PRRSV一般特征和分类地位第10-11页
  2、PRRSV的分子生物学结构特点第11-17页
   (1) 5’端非编码区(5’UTR)第13页
   (2) 3’端非编码区(3’UTR)第13页
   (3) ORF1第13-14页
   (4) GP2蛋白第14页
   (5) GP3蛋白第14-15页
   (6) GP4蛋白第15页
   (7) E蛋白第15-16页
   (8) M蛋白第16页
   (9) N蛋白第16-17页
  3、两种基因型代表株基因组结构的比较第17-18页
 二、PRRSV的传播方式第18-21页
  1、运输带来的危险第19页
  2、垂直传播第19-20页
  3、其它传播方式第20-21页
 三、PRRSV的免疫学特性第21-22页
  1、对免疫相关细胞的影响第21页
  2、细胞免疫第21-22页
  3、体液免疫第22页
 四、发病机制与病理组织学变化第22-25页
  1、发病机制第22-23页
  2、病理组织学变化第23-25页
   (1) 眼观病变第23页
   (2) 免疫组化第23-24页
   (3) 显微病变第24-25页
 五、诊断第25-30页
  1、临床诊断第25页
  2、病毒分离第25-26页
  3、血清学诊断第26-28页
   (1) 免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)第26页
   (2) 间接荧光抗体技术(IFA)第26页
   (3) 血清中和试验(SN)第26-27页
   (4) 酶联免疫吸附试验(ELISA)第27-28页
  4、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)第28-29页
  5、免疫电镜金标记技术第29-30页
  6、用活猪感染肺泡巨噬细胞诊断第30页
 六、防制措施第30-34页
  1、PRRS在我国的现状第30-31页
  2、PRRS疫苗的研制第31-32页
  3、PRRS基因工程苗第32页
  4、针对PRRS的综合防制措施第32-34页
 七、结语第34-35页
材料与方法第35-50页
 一、材料第35-41页
  1、PRRS病料第35页
  2、引物第35-36页
  3、细胞系第36页
  4、质粒载体第36页
  5、菌种第36页
  6、试剂及配制第36-38页
  7、PAM的制作第38页
  8、蛋白电泳主要试剂的配制第38-41页
 二、方法第41-50页
  1、技术路线第41-42页
  2、病料和病毒分离株阳性鉴定第42页
  3、病料中RNA的提取第42页
  4、RT-PCR第42-43页
  5、PRRSV的分离与鉴定第43-44页
  6、目的基因的获得第44页
  7、PCR产物胶回收第44-45页
  8、DH5α、BL21(DE3)感受态细胞的制备第45页
  9、基因克隆第45-47页
   (1) 目的基因的连接第45-46页
   (2) 转化第46页
   (3) 抽提质粒第46-47页
   (4) 重组质粒酶切鉴定及PCR鉴定第47页
  10、基因测序第47页
  11、测序结果的处理与分析第47页
  12、构建原核表达重组质粒载体第47-49页
  13、SDS-PAGE第49-50页
结果第50-57页
 1、RT-PCR对PRRS疑似病料的检测第50-51页
 2、GD株的分离第51-53页
  (1) 病料接种细胞第51-52页
  (2) CPE显微镜观察及照片第52页
  (3) GD株的RT-PCR鉴定第52-53页
 3、GD株的进化分析第53-54页
 4、E基因片段的扩增及回收第54-55页
 5、重组质粒的酶切及PCR鉴定第55-56页
 6、SDS-PAGE第56-57页
分析与讨论第57-63页
 1、引物特异性第57页
 2、连接与转化第57-58页
 3、PRRSV的培养特性第58-59页
 4、RRRSV的分离第59-60页
 5、同源性分析第60页
 6、抗原变异第60-61页
 7、构建原核表达质粒载体第61页
 8、重组质粒的原核表达第61-63页
结论第63-64页
参考文献第64-78页
附表1第78-79页
附表2第79-80页
致谢第80-81页
读研期间发表论文第81页

论文共81页,点击 下载论文
上一篇:基于Petri网的工作流建模及其工具的研究与实现
下一篇:秸秆对球形棕囊藻生长的抑制作用及其机理研究