广西猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离及E基因的原核表达
中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-10页 |
前言 | 第10-35页 |
一、病原学 | 第10-18页 |
1、PRRSV一般特征和分类地位 | 第10-11页 |
2、PRRSV的分子生物学结构特点 | 第11-17页 |
(1) 5’端非编码区(5’UTR) | 第13页 |
(2) 3’端非编码区(3’UTR) | 第13页 |
(3) ORF1 | 第13-14页 |
(4) GP2蛋白 | 第14页 |
(5) GP3蛋白 | 第14-15页 |
(6) GP4蛋白 | 第15页 |
(7) E蛋白 | 第15-16页 |
(8) M蛋白 | 第16页 |
(9) N蛋白 | 第16-17页 |
3、两种基因型代表株基因组结构的比较 | 第17-18页 |
二、PRRSV的传播方式 | 第18-21页 |
1、运输带来的危险 | 第19页 |
2、垂直传播 | 第19-20页 |
3、其它传播方式 | 第20-21页 |
三、PRRSV的免疫学特性 | 第21-22页 |
1、对免疫相关细胞的影响 | 第21页 |
2、细胞免疫 | 第21-22页 |
3、体液免疫 | 第22页 |
四、发病机制与病理组织学变化 | 第22-25页 |
1、发病机制 | 第22-23页 |
2、病理组织学变化 | 第23-25页 |
(1) 眼观病变 | 第23页 |
(2) 免疫组化 | 第23-24页 |
(3) 显微病变 | 第24-25页 |
五、诊断 | 第25-30页 |
1、临床诊断 | 第25页 |
2、病毒分离 | 第25-26页 |
3、血清学诊断 | 第26-28页 |
(1) 免疫过氧化物酶单层试验(IPMA) | 第26页 |
(2) 间接荧光抗体技术(IFA) | 第26页 |
(3) 血清中和试验(SN) | 第26-27页 |
(4) 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第27-28页 |
4、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第28-29页 |
5、免疫电镜金标记技术 | 第29-30页 |
6、用活猪感染肺泡巨噬细胞诊断 | 第30页 |
六、防制措施 | 第30-34页 |
1、PRRS在我国的现状 | 第30-31页 |
2、PRRS疫苗的研制 | 第31-32页 |
3、PRRS基因工程苗 | 第32页 |
4、针对PRRS的综合防制措施 | 第32-34页 |
七、结语 | 第34-35页 |
材料与方法 | 第35-50页 |
一、材料 | 第35-41页 |
1、PRRS病料 | 第35页 |
2、引物 | 第35-36页 |
3、细胞系 | 第36页 |
4、质粒载体 | 第36页 |
5、菌种 | 第36页 |
6、试剂及配制 | 第36-38页 |
7、PAM的制作 | 第38页 |
8、蛋白电泳主要试剂的配制 | 第38-41页 |
二、方法 | 第41-50页 |
1、技术路线 | 第41-42页 |
2、病料和病毒分离株阳性鉴定 | 第42页 |
3、病料中RNA的提取 | 第42页 |
4、RT-PCR | 第42-43页 |
5、PRRSV的分离与鉴定 | 第43-44页 |
6、目的基因的获得 | 第44页 |
7、PCR产物胶回收 | 第44-45页 |
8、DH5α、BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第45页 |
9、基因克隆 | 第45-47页 |
(1) 目的基因的连接 | 第45-46页 |
(2) 转化 | 第46页 |
(3) 抽提质粒 | 第46-47页 |
(4) 重组质粒酶切鉴定及PCR鉴定 | 第47页 |
10、基因测序 | 第47页 |
11、测序结果的处理与分析 | 第47页 |
12、构建原核表达重组质粒载体 | 第47-49页 |
13、SDS-PAGE | 第49-50页 |
结果 | 第50-57页 |
1、RT-PCR对PRRS疑似病料的检测 | 第50-51页 |
2、GD株的分离 | 第51-53页 |
(1) 病料接种细胞 | 第51-52页 |
(2) CPE显微镜观察及照片 | 第52页 |
(3) GD株的RT-PCR鉴定 | 第52-53页 |
3、GD株的进化分析 | 第53-54页 |
4、E基因片段的扩增及回收 | 第54-55页 |
5、重组质粒的酶切及PCR鉴定 | 第55-56页 |
6、SDS-PAGE | 第56-57页 |
分析与讨论 | 第57-63页 |
1、引物特异性 | 第57页 |
2、连接与转化 | 第57-58页 |
3、PRRSV的培养特性 | 第58-59页 |
4、RRRSV的分离 | 第59-60页 |
5、同源性分析 | 第60页 |
6、抗原变异 | 第60-61页 |
7、构建原核表达质粒载体 | 第61页 |
8、重组质粒的原核表达 | 第61-63页 |
结论 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-78页 |
附表1 | 第78-79页 |
附表2 | 第79-80页 |
致谢 | 第80-81页 |
读研期间发表论文 | 第81页 |