| 1 前言 | 第1-34页 |
| ·植酸酶的研究进展 | 第10-27页 |
| ·植酸酶的作用机理 | 第10页 |
| ·植酸酶的来源 | 第10-12页 |
| ·植物植酸酶的来源 | 第11页 |
| ·动物植酸酶的来源 | 第11-12页 |
| ·微生物植酸酶的来源 | 第12页 |
| ·植酸酶的特性 | 第12-15页 |
| ·植酸酶的功能 | 第15-17页 |
| ·提高磷的吸收，降低磷的排泄 | 第15页 |
| ·提高微量元素的吸收 | 第15页 |
| ·提高蛋白质的利用率 | 第15-17页 |
| ·植酸酶的应用 | 第17-21页 |
| ·植酸酶在鱼用饲料中的应用意义 | 第17-19页 |
| ·植酸酶在蛋鸡和肉鸡生产上的应用 | 第19-20页 |
| ·植酸酶在食品中的应用 | 第20-21页 |
| ·植酸酶在化工医药产品开发研究中的应用 | 第21页 |
| ·植酸酶高产菌株的研究进展 | 第21-22页 |
| ·植酸酶的基因工程研究进展 | 第22-27页 |
| ·利用微生物反应器高效表达植酸酶基因的研究进展 | 第23-26页 |
| ·利用动物反应器高效表达植酸酶基因的研究进展 | 第26页 |
| ·利用植物反应器高效表达植酸酶基因的研究进展 | 第26-27页 |
| ·TAIL-PCR研究进展 | 第27-32页 |
| ·TAIL-PCR技术的原理 | 第27-29页 |
| ·TAIL-PCR技术优点、难点以及对策 | 第29-32页 |
| ·AD引物的优化设计 | 第30-31页 |
| ·AD池的建立 | 第31-32页 |
| ·AD随机简并引物与不同酶组合 | 第32页 |
| ·PCR产物经连接转化、鉴定、测序 | 第32页 |
| ·第三轮PCR中采用改进的13个TAIL-PCR循环 | 第32页 |
| ·本研究的目的意义 | 第32-33页 |
| ·技术路线 | 第33-34页 |
| 2 实验材料与方法 | 第34-47页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第34-35页 |
| ·实验材料及试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-47页 |
| ·食用菌产植酸酶菌株的筛选 | 第35页 |
| ·金针菇Fla1植酸酶基因区域的克隆 | 第35-41页 |
| ·菌丝体的培养与收集 | 第35页 |
| ·DNA提取 | 第35-36页 |
| ·引物的设计与合成 | 第36页 |
| ·反应体系 | 第36-37页 |
| ·反应程序 | 第37页 |
| ·PCR产物的回收 | 第37-38页 |
| ·PCR产物与T载体连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·PCR连接产物的转化 | 第39页 |
| ·重组质粒的提取 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·平菇Ple1植酸酶基因区域的克隆 | 第41-42页 |
| ·菌丝体的培养与收集及DNA提取 | 第41页 |
| ·引物的设计与合成 | 第41页 |
| ·反应体系 | 第41页 |
| ·反应程序 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第42页 |
| ·平菇2号(Ple2)植酸酶基因区域的克隆 | 第42-43页 |
| ·菌丝体的培养与收集及DNA提取 | 第42页 |
| ·引物的设计与合成 | 第42页 |
| ·反应体系 | 第42页 |
| ·反应程序 | 第42-43页 |
| ·PCR产物的回收及连接 | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及重组质粒的提取及鉴定 | 第43页 |
| ·平菇ple2植酸酶基因区域的未知侧翼序列的克隆 | 第43-47页 |
| ·引物的设计 | 第43-44页 |
| ·简并引物设计 | 第43-44页 |
| ·特异性引物的设计 | 第44页 |
| ·平菇2号植酸酶基因区域的未知侧翼序列的TAIL-PCR扩增 | 第44-46页 |
| ·PCR产物的回收及连接 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第46页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-64页 |
| ·食用菌产植酸酶菌株的筛选 | 第47-48页 |
| ·金针菇Fla1植酸酶基因区域的克隆 | 第48-51页 |
| ·Fla1植酸酶基因区域的PCR扩增 | 第48-49页 |
| ·酶切鉴定 | 第49页 |
| ·序列测定及分析 | 第49-51页 |
| ·测序结果 | 第49-50页 |
| ·序列分析 | 第50-51页 |
| ·平菇Ple1植酸酶基因区域的克隆 | 第51-54页 |
| ·Ple1植酸酶基因区域的PCR扩增 | 第51页 |
| ·酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·序列与分析 | 第52-54页 |
| ·测序结果 | 第52-53页 |
| ·序列分析 | 第53-54页 |
| ·平菇2号(Ple2)植酸酶基因的克隆 | 第54-57页 |
| ·Ple2植酸酶基因区域的PCR扩增 | 第54页 |
| ·酶切鉴定 | 第54-55页 |
| ·序列与分析 | 第55-57页 |
| ·测序结果 | 第55页 |
| ·序列分析 | 第55-57页 |
| ·平菇Ple2phy的未知侧翼序列的克隆 | 第57-64页 |
| ·3’端和5’端的TAIL-PCR扩增 | 第57-58页 |
| ·质粒pGT ple2phy2和pGT ple2phy3的酶切鉴定 | 第58-59页 |
| ·Ple2植酸酶基因3’端和5’端的序列测定及分析 | 第59-64页 |
| 4 讨论 | 第64-69页 |
| ·植酸酶基因的获得 | 第64-66页 |
| ·序列比较分析 | 第66-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第78-79页 |
| 附录：测序图 | 第79-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
