| 前言 | 第1-21页 |
| 附：研究技术路线 | 第20-21页 |
| 第一章：猪和小鼠Endoglin胞外段基因的克隆扩增、真核表达载体的构建及鉴定 | 第21-39页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·细菌培养基 | 第21-22页 |
| ·工具酶 | 第22页 |
| ·提取总RNA试剂及RT-PCR试剂盒及相关试剂 | 第22-23页 |
| ·胶回收试剂盒及小量质粒回收试剂盒 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第23页 |
| ·仪器设备 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-30页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23-24页 |
| ·猪和小鼠胚肝总RNA的提取 | 第24页 |
| ·RT-PCR扩增猪Endoglin胞外段cDNA | 第24-25页 |
| ·RT-PCR扩增小鼠Endoglin胞外段cDNA | 第25-26页 |
| ·cDNA片段的回收 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·质粒的小量提取 | 第27页 |
| ·质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第27页 |
| ·内切酶酶切和连接反应 | 第27-28页 |
| ·猪Endoglin真核表达质粒的构建 | 第28页 |
| ·重组猪Endoglin真核表达质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·小鼠Endoglin真核表达质粒的构建 | 第29页 |
| ·鼠重组endoglin真核表达质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-36页 |
| ·猪Endoglin胞外段基因克隆及真核表达载体的鉴定 | 第30-33页 |
| ·小鼠Endoglin胞外段真核表达质粒的构建与鉴定 | 第33-36页 |
| 4 讨论 | 第36-39页 |
| 第二章：猪和小鼠Endolgin胞外段真核表达载体体外真核表达鉴定 | 第39-49页 |
| 1 材料 | 第39-41页 |
| ·细胞株 | 第39页 |
| ·细胞培养基 | 第39页 |
| ·主要试剂盒和生化试剂 | 第39-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-45页 |
| ·各种溶液的配制方法 | 第41-42页 |
| ·COS-1细胞培养 | 第42页 |
| ·重组质粒的大量制备和纯化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒ppEDG和pmEDG体外转染COS-1细胞 | 第43-44页 |
| ·总RNA提取 | 第44页 |
| ·RT-PCR | 第44页 |
| ·免疫印迹(Western blot)分析 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-46页 |
| ·重组质粒真核表达的RT-PCR鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒真核表达的Western blot鉴定 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 第三章：猪Endoigin胞外段真核表达质粒DNA疫苗抗肿瘤效果观察 | 第49-57页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| ·肿瘤细胞系 | 第49页 |
| ·细胞培养基 | 第49页 |
| ·主要试剂盒及生化试剂 | 第49页 |
| ·实验动物 | 第49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-52页 |
| ·肿瘤细胞培养 | 第50-51页 |
| ·建立肿瘤动物模型 | 第51页 |
| ·疫苗免疫毒副作用观察 | 第51页 |
| ·统计学分析 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-55页 |
| ·肿瘤保护性免疫效果观察 | 第52页 |
| ·肿瘤治疗性免疫效果观察 | 第52页 |
| ·抗小鼠肿瘤转移效果观察 | 第52-54页 |
| ·毒副反应的观察 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第四章：猪Endolgin胞外段真核表达质粒DNA疫苗抗肿瘤作用机理研究 | 第57-79页 |
| 1 材料 | 第57-59页 |
| ·肿瘤细胞系 | 第57页 |
| ·细胞培养基 | 第57页 |
| ·主要试剂盒及生化试剂 | 第57-58页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| ·主要仪器设备 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-65页 |
| ·肿瘤细胞培养 | 第59-60页 |
| ·肿瘤组织标本及血清的获取 | 第60页 |
| ·溶液的配制方法 | 第60-61页 |
| ·ELISA检测免疫小鼠血清中抗体滴度 | 第61页 |
| ·Enzyme-linked immunospot(ELISPOT)assay | 第61-62页 |
| ·脾细胞悬液的制备 | 第62页 |
| ·免疫印迹(Western blot)分析 | 第62-63页 |
| ·免疫球蛋白亚型测定 | 第63页 |
| ·血清免疫球蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| ·清免疫球蛋白过继免疫治疗 | 第64页 |
| ·肿瘤组织内微血管免疫组化染色 | 第64-65页 |
| ·藻酸盐包裹实验观察肿瘤血管生成情况 | 第65页 |
| ·统计学分析 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-73页 |
| ·ELISA检测血清中抗猪和抗小鼠Endoglin抗体 | 第65-66页 |
| ·Western blot检测血清中抗猪和小鼠Endoglin抗体 | 第66-67页 |
| ·ELISPOT检测脾脏中分泌抗猪和小鼠Endoglin抗体的B淋巴细胞 | 第67-68页 |
| ·抗Endoglin分子的自身抗体抑制肿瘤生长 | 第68-69页 |
| ·免疫荧光检测肿瘤组织中抗自身抗体沉积 | 第69页 |
| ·自身免疫球蛋白过继被动免疫治疗 | 第69-70页 |
| ·抗Endoglin分子的自身抗体抑制肿瘤血管生成 | 第70-73页 |
| 4 讨论 | 第73-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 综述：Endoglin与肿瘤血管生成治疗研究进展 | 第80-91页 |
| 1.Endoglin的结构与功能 | 第81-83页 |
| 2.Endoglin的组织表达 | 第83-85页 |
| 3.Endoglin与血管生成和血管发育 | 第85-86页 |
| 4.Endoglin S亚型的临床应用 | 第86-87页 |
| 5.Endoglin与肿瘤的诊断和预后 | 第87-89页 |
| 6.以Endoglin为靶标的抗血管生成治疗 | 第89-90页 |
| 7.结论与展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第108页 |
