| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第7-17页 |
| ·酸性蛋白酶 | 第7-12页 |
| ·概论 | 第7页 |
| ·酸性蛋白酶的性质 | 第7-8页 |
| ·产酸性蛋白酶微生物 | 第8页 |
| ·酸性蛋白酶的种类 | 第8-9页 |
| ·酸性蛋白酶的催化机制 | 第9-11页 |
| ·酸性蛋白酶的应用 | 第11-12页 |
| ·酸性蛋白酶在酒精生产中的应用 | 第12-14页 |
| ·酒精的性质及主要应用领域 | 第12页 |
| ·我国酒精生产概况 | 第12-14页 |
| ·酸性蛋白酶在酒精生产中的应用 | 第14页 |
| ·国内外微生物酸性蛋白酶研究进展 | 第14-16页 |
| ·微生物酸性蛋白酶传统研究 | 第14-15页 |
| ·微生物酸性蛋白酶基因工程研究 | 第15-16页 |
| ·本文的主要研究内容 | 第16-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·工具酶和试剂 | 第17-18页 |
| ·培养基和培养条件 | 第18-19页 |
| ·染色体的提取 | 第19页 |
| ·DNA操作技术 | 第19页 |
| ·转化 | 第19页 |
| ·mcp、na、P_(GPD)片段的 PCR扩增和序列测定 | 第19-20页 |
| ·发酵试验 | 第20页 |
| ·酶活测定 | 第20-21页 |
| ·重组酶性质的确定 | 第21页 |
| ·最适pH | 第21页 |
| ·最适温度 | 第21页 |
| ·酒精测定 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-23页 |
| 3 结果和讨论 | 第23-43页 |
| ·微小毛霉mcp的克隆及初步表达 | 第23-29页 |
| ·微小毛霉mcp的扩增 | 第23页 |
| ·微小毛霉mcp序列的测定及分析 | 第23-27页 |
| ·重组质粒pPIC9K-mcp的构建 | 第27-28页 |
| ·重组巴斯德毕赤酵母的构建与鉴定 | 第28-29页 |
| ·mcp在P. pastoris KM71中的表达 | 第29页 |
| ·粗糙脉孢霉ap的克隆及初步表达 | 第29-39页 |
| ·粗糙脉孢霉ap的扩增 | 第29页 |
| ·ap序列的测定及分析 | 第29-35页 |
| ·重组质粒pPIC9K-ap的构建 | 第35-37页 |
| ·重组质粒pPIC9K-ap转化P.pastoris GS115 | 第37-38页 |
| ·ap在P. pastoris GS115中的表达 | 第38页 |
| ·重组酸性蛋白酶的粗酶酶学性质 | 第38-39页 |
| ·粗糙脉孢霉ap在工业酒精生产菌酿酒酵母825中的应用 | 第39-43页 |
| ·酿酒酵母 W303A-1 P_(GPD)序列的扩增 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pPIC9K-P_(GPD)-ap的构建 | 第40页 |
| ·重组质粒pPIC9K-P_(GPD)-ap-14-13~#转化酿酒酵母825 | 第40-41页 |
| ·重组菌APS酸性蛋白酶表达水平 | 第41页 |
| ·重组菌APS酒精发酵 | 第41-43页 |
| 论文主要结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 硕士研究生期间在科学技术期刊上发表的论文 | 第48页 |
