中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-8页 |
缩略语 | 第8-9页 |
引言 | 第9-18页 |
第一部分 磁捕获杂交法提取和纯化细菌mRNA方法的建立 | 第18-34页 |
1 材料与方法 | 第19-28页 |
·材料 | 第19-22页 |
·方法 | 第22-28页 |
·热石炭酸法提取鼠疫菌总RNA | 第23页 |
·RNA定量和纯度检测 | 第23-24页 |
·磁捕获杂交法提取和纯化细菌mRNA | 第24-25页 |
·mRNA质量检验 | 第25-27页 |
·磁捕获杂交法提取和纯化细菌mRNA方法在大肠杆菌中的应用 | 第27-28页 |
2 结果 | 第28-31页 |
·RNA定量和纯度检测 | 第28页 |
·生物素标记的寡核苷酸探针加入量的确定 | 第28-29页 |
·磁珠与RNA比例关系的确定 | 第29页 |
·mRNA完整性鉴定结果 | 第29-30页 |
·磁捕获杂交法提取和纯化细菌mRNA方法在大肠杆菌中的应用 | 第30-31页 |
3 讨论 | 第31-33页 |
4 小结 | 第33-34页 |
第二部分 鼠疫菌表达谱技术平台的建立与评价 | 第34-59页 |
1 材料与方法 | 第35-43页 |
·材料 | 第35-36页 |
·方法 | 第36-43页 |
·鼠疫菌总RNA与mRNA提取 | 第36-38页 |
·直接法标记靶分子与芯片杂交 | 第38-39页 |
·实验条件优化 | 第39-40页 |
·标记方法的确立 | 第40-41页 |
·不同引物的比较 | 第41-42页 |
·DNA芯片基因表达谱技术的可靠性评价 | 第42-43页 |
2 结果与讨论 | 第43-58页 |
·直接法标记靶分子与芯片杂交 | 第43页 |
·反转录酶用量的影响 | 第43-45页 |
·荧光素标记cDNA纯化方法的影响 | 第45-47页 |
·杂交条件优化 | 第47-49页 |
·RNA用量的影响 | 第49-50页 |
·直接标记与间接标记方法比较 | 第50-53页 |
·不同引物的比较 | 第53页 |
·DNA芯片基因表达谱技术的可靠性评价 | 第53-58页 |
3 小结 | 第58-59页 |
第三部分 温度调节鼠疫菌基因表达谱分析的研究 | 第59-78页 |
1 材料与方法 | 第60-66页 |
·材料 | 第60页 |
·方法 | 第60-66页 |
·菌株的复苏及重鉴定 | 第60-61页 |
·TMH培养基制备 | 第61-64页 |
·基因表达谱研究 | 第64-66页 |
2 结果 | 第66-70页 |
·菌株的复苏及重鉴定 | 第66页 |
·细菌RNA提取 | 第66-67页 |
·芯片杂交结果 | 第67-69页 |
·数据分析结果 | 第69-70页 |
3 讨论 | 第70-77页 |
4 小结 | 第77-78页 |
第四部分 实时定量RT-PCR对DNA芯片基因表达谱技术的评价 | 第78-85页 |
1 材料与方法 | 第78-81页 |
2 结果 | 第81-83页 |
3 讨论 | 第83-84页 |
4 小结 | 第84-85页 |
参考文献 | 第85-92页 |
致谢 | 第92-93页 |
附录1: DNA芯片基因表达谱分析技术实验操作手册 | 第93-98页 |
附表1: 相对于26℃,37℃条件下上调的基因信息列表 | 第98-105页 |
附表2: 相对于37℃,26℃条件下上调的基因信息列表 | 第105-115页 |
综述一: 鼠疫耶尔森氏菌基因表达的环境调节 | 第115-124页 |
综述二: 细菌提取mRNA的方法 | 第124-129页 |
发表论文: Bacterial mRNA Purification by Magnetic Capture-Hybridization Method博士期间文章发表与申请专利 | 第129-135页 |