内容提要 | 第1-3页 |
英文摘要 | 第3-8页 |
序言 | 第8-10页 |
第一部分 文献综述 | 第10-30页 |
脂肪酶蛋白质工程研究进展 | 第10-30页 |
1. 活性位点(ACTIVE SITE)与活性(ACTIVITY)研究 | 第11-14页 |
2. 专一性(SPECIFICITY)研究 | 第14-21页 |
3. 稳定性(STABILITY)研究 | 第21-23页 |
4. 盖(LID)功能研究 | 第23-26页 |
5. 表达研究 | 第26-27页 |
6. 钙结合位点研究 | 第27页 |
7. 增加洗涤效果和表面活性剂抗性研究 | 第27-30页 |
第二部分 材料与方法 | 第30-43页 |
1. 材料 | 第30-32页 |
2. 实验方法 | 第32-43页 |
2.1 PEL基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第32-38页 |
2.2 PEL-P163A定点突变 | 第38-40页 |
2.3 PEL-D92L定点突变 | 第40-41页 |
2.4 PEL的随机诱变 | 第41-43页 |
第三部分 结果与分析 | 第43-64页 |
1. PEL基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第43-49页 |
1.1 表达质粒pPIC3.5K-PEL的构建 | 第43-44页 |
1.2 重组酵母菌GS-pPIC3.5K-PEL筛选 | 第44页 |
1.3 表达产物PEL-GS的鉴定 | 第44-46页 |
1.4 PEL-GS发酵条件优化 | 第46-49页 |
2. PEL-P163A定点突变 | 第49-56页 |
2.1 突变点的选择 | 第49-50页 |
2.2 突变基因P163A的获得 | 第50-52页 |
2.3 突变基因在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达 | 第52-53页 |
2.4 PEL-P163A-GS最适反应温度和热稳定性的研究 | 第53-55页 |
2.5 PEL-P163A-GS发酵条件的优化 | 第55-56页 |
2.6 突变基因在巴斯德毕赤酵母SMD1168中的表达 | 第56页 |
3. PEI-D92L定点突变 | 第56-60页 |
3.1 突变点的选择 | 第56-57页 |
3.2 突变基因D92L的获得 | 第57-58页 |
3.3 突变基因在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达 | 第58-59页 |
3.4 PEL-D92L-GS最适反应温度和热稳定性的研究 | 第59-60页 |
4. PEL的随机诱变 | 第60-64页 |
4.1 易错PCR(ERROR PRONE PCR) | 第60-61页 |
4.2 突变体的筛选 | 第61-62页 |
4.3 突变体最适反应温度和热稳定性的研究 | 第62-64页 |
第四部分 小结与讨论 | 第64-68页 |
参考文献 | 第68-79页 |
中文摘要 | 第79-82页 |
附录 在学期间发表和完成的论文 | 第82-83页 |
致谢 | 第83页 |