缩略词表 | 第1-11页 |
中文摘要 | 第11-13页 |
第一篇 立论依据和文献综述 | 第13-38页 |
第一章 立论依据和研究思路 | 第13-17页 |
1. 立论依据 | 第13-15页 |
2. 本论文的研究思路和目标 | 第15-16页 |
3. 研究内容及技术路线 | 第16-17页 |
第二章 文献综述 | 第17-38页 |
1 果实成熟的生理过程 | 第17-20页 |
1.1 果实色、香、味的变化 | 第17-18页 |
1.2 果实质地的变化 | 第18-19页 |
1.3 乙烯在果实成熟过程中的作用 | 第19-20页 |
2 果实成熟过程的分子生物学研究 | 第20-29页 |
2.1 果实成熟相关基因的克隆 | 第20-21页 |
2.2 成熟相关基因表达的影响因素 | 第21-22页 |
2.2.1 基因在成熟期间的表达 | 第21页 |
2.2.2 乙烯及IAA对基因表达的调控 | 第21-22页 |
2.2.3 环境刺激对基因表达的影响 | 第22页 |
2.3 果实成熟相关基因上游启动子的调控研究 | 第22-29页 |
2.3.1 番茄的PG基因的表达调控 | 第23-24页 |
2.3.2 番茄2A11基因的表达调控 | 第24页 |
2.3.3 番茄E4基因的表达调控 | 第24-26页 |
2.3.4 番茄E8基因的表达调控 | 第26-27页 |
2.3.5 苹果ACC氧化酶基因及PG基因的表达调控 | 第27-28页 |
2.3.6 草莓EGase基因的表达调控 | 第28页 |
2.3.7 其它果实成熟相关基因的表达调控 | 第28-29页 |
3 果实成熟相关基因及其启动子的应用研究进展 | 第29-31页 |
3.1 反义技术控制果实成熟 | 第29-30页 |
3.2 果实特异性启动子在基因工程研究中的应用 | 第30-31页 |
4 其它类型的植物启动子研究进展 | 第31-36页 |
4.1 植物启动子的一般特征 | 第31-32页 |
4.2 激素效应启动子 | 第32-34页 |
4.2.1 生长素效应启动子 | 第32-33页 |
4.2.2 其它乙烯效应启动子 | 第33页 |
4.2.3 ABA效应启动子 | 第33-34页 |
4.2.4 GA效应启动子 | 第34页 |
4.3 环境因素诱导表达启动子 | 第34-36页 |
5 植物AGPase研究进展 | 第36-38页 |
5.1 植物AGPase的基本特性 | 第36页 |
5.2 植物AGPase的分子生物学研究 | 第36-38页 |
第二篇 西瓜wml1 5’端启动子区域在番茄中的表达分析 | 第38-53页 |
第三章 西瓜wml1 5’端启动子区域对番茄的遗传转化及其转录调控功能研究 | 第38-53页 |
1 材料与方法 | 第39-43页 |
1.1 植物材料 | 第39页 |
1.2 质粒载体与菌株 | 第39页 |
1.3 培养基 | 第39-40页 |
1.4 wml1的5’端启动子区域的结构组成分析 | 第40页 |
1.5 不同长度的wml1的5’端启动子区域遗传转化载体的构建 | 第40-41页 |
1.5.1 不同长度的wml1的5’端启动子区域的获得及亚克隆过程 | 第40-41页 |
1.5.2 适合于农杆菌介导的遗传转化的植物表达载体的构建 | 第41页 |
1.6 不同长度的wml1的5’端启动子区域对番茄的遗传转化及抗性芽的筛选 | 第41-42页 |
1.6.1 根癌农杆菌的培养 | 第41页 |
1.6.2 外植体的准备及预培养 | 第41页 |
1.6.3 转化与再生 | 第41-42页 |
1.7 转基因番茄植株的PCR鉴定 | 第42页 |
1.8 转基因植株的Southern杂交鉴定 | 第42页 |
1.9 GUS组织化学染色 | 第42页 |
1.10 GUS酶活性的定量分析 | 第42-43页 |
1.11 RNA的小量提取及RT-PCR反应 | 第43页 |
2 结果 | 第43-50页 |
2.1 不同长度的wml1的5’端启动子区域的植物表达载体的构建 | 第43-45页 |
2.2 各载体对番茄的遗传转化 | 第45页 |
2.3 转基因植株总DNA的PCR特异扩增检测 | 第45-46页 |
2.4 转基因植株的Southern杂交分析 | 第46-47页 |
2.5 转基因植株中GUS基因表达的组织化学分析和GUS酶活性分析 | 第47-48页 |
2.6 转基因植株叶片的RT-PCR扩增 | 第48-50页 |
3 讨论 | 第50-53页 |
第三篇 wml1 5’端启动子区域在西瓜中的表达调控 | 第53-75页 |
第四章 wml1 5’端启动子区域在西瓜中的瞬时表达分析 | 第54-62页 |
1 材料与方法 | 第54-56页 |
1.1 植物材料 | 第54页 |
1.2 质粒载体与菌株 | 第54页 |
1.3 亚克隆载体的构建 | 第54页 |
1.4 基因枪介导的瞬间表达载体的构建 | 第54-55页 |
1.5 农杆菌介导的瞬间表达载体的构建 | 第55页 |
1.6 基因枪介导的遗传转化 | 第55-56页 |
1.6.1 轰击材料的处理 | 第55页 |
1.6.2 质粒的提取和纯化 | 第55页 |
1.6.3 金粉的制备 | 第55页 |
1.6.4 微弹载体的制备 | 第55-56页 |
1.6.5 装弹轰击 | 第56页 |
1.7 农杆菌介导的瞬间表达转化 | 第56页 |
1.8 GUS基因瞬间表达的组织化学分析 | 第56页 |
2 结果 | 第56-60页 |
2.1 wml1 5’端启动子区不同长度片段瞬间表达载体的构建 | 第56-58页 |
2.2 基因枪介导的GUS基因瞬间表达检测与分析 | 第58-59页 |
2.3 农杆菌介导的GUS基因在西瓜果实中的瞬间表达分析 | 第59-60页 |
3 讨论 | 第60-62页 |
第五章 西瓜遗传转化体系的优化研究 | 第62-70页 |
1 材料和方法 | 第62-65页 |
1.1 植物材料 | 第62页 |
1.2 培养基 | 第62页 |
1.3 质粒和菌种 | 第62-63页 |
1.4 无菌苗的获得 | 第63页 |
1.5 外植体的准备 | 第63页 |
1.5.1 不同苗龄对转化及再生的影响 | 第63页 |
1.5.2 不同切苗方式对转化及再生的影响 | 第63页 |
1.5.3 不同预培养时间对转化及再生的影响 | 第63页 |
1.6 根癌农杆菌的培养 | 第63页 |
1.7 遗传转化 | 第63-64页 |
1.7.1 不同时间的超声波处理对转化再生的影响 | 第64页 |
1.7.2 不同时间的农杆菌悬浮液浸泡对转化再生的影响 | 第64页 |
1.7.3 不同共培养时间对转化再生的影响 | 第64页 |
1.8 抗性芽的伸长及长成正常植株 | 第64页 |
1.9 DNA的少量提取及转基因植株的PCR鉴定 | 第64-65页 |
1.10 GUS组织化学染色分析 | 第65页 |
2 结果与讨论 | 第65-69页 |
2.1 不同苗龄对Kan抗性芽分化的影响 | 第65页 |
2.2 不同切苗方式对Kan抗性芽分化及抗性愈伤诱导效率的影响 | 第65-66页 |
2.3 不同预培养时间对Kan抗性芽分化及基因转化效率的影响 | 第66-67页 |
2.4 不同时间的超声波处理对抗性芽分化及基因转化效率的影响 | 第67-68页 |
2.5 农杆菌悬浮液浸泡时间对抗性芽分化及转化效率的影响 | 第68页 |
2.6 共培养时间对西瓜转化再生的影响 | 第68-69页 |
3 小结 | 第69-70页 |
第六章 wml1 5’端不同长度的启动子区域对西瓜的遗传转化 | 第70-75页 |
1 材料和方法 | 第70-72页 |
1.1 植物材料 | 第70-71页 |
1.2 质粒与菌种 | 第71页 |
1.3 培养基 | 第71页 |
1.4 根癌农杆菌的培养 | 第71页 |
1.5 遗传转化 | 第71页 |
1.6 抗性芽的伸长及长成正常植株 | 第71页 |
1.7 DNA的少量提取及转基因植株的PCR鉴定 | 第71-72页 |
2 结果 | 第72-75页 |
2.1 各载体转化后Kan抗性植株的获得 | 第72页 |
2.2 转基因西瓜植株的PCR特异扩增检测 | 第72-75页 |
第四篇 西瓜果实特异性启动子在定向提高西瓜果实甜味品质中的应用 | 第75-82页 |
第七章 西瓜果实特异性启动子调控的Brazzein基因植物表达载体的构建 | 第75-82页 |
1 材料与方法 | 第76-77页 |
1.1 质粒与菌种 | 第76页 |
1.2 果实特异启动子片段的获得 | 第76页 |
1.3 Brazzein基因的分离 | 第76-77页 |
1.4 GUS基因的分离 | 第77页 |
1.5 果实特异性启动子与Brazzein基因在pBI221质粒载体上的融合 | 第77页 |
1.6 适合于遗传转化的表达载体的构建 | 第77页 |
2 结果 | 第77-82页 |
展望和后续研究 | 第82-84页 |
参考文献 | 第84-104页 |
英文摘要 | 第104-106页 |