| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| ·脂肪酶的研究进展 | 第11-17页 |
| ·脂肪酶的简介 | 第11-12页 |
| ·脂肪酶的结构与催化机制 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶的性质 | 第13-15页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第15-17页 |
| ·微生物脂肪酶的研究现状 | 第17-21页 |
| ·产脂肪酶微生物的来源 | 第17-18页 |
| ·脂肪酶的酶活力检测方法 | 第18-19页 |
| ·微生物脂肪酶的纯化 | 第19页 |
| ·微生物脂肪酶的毕赤酵母表达系统 | 第19-21页 |
| ·球形马拉色菌的研究进展 | 第21-23页 |
| ·球形马拉色菌的简介 | 第21页 |
| ·脂肪酶在球形马拉色菌的致病过程中的作用 | 第21-22页 |
| ·球形马拉色菌的基因组学特点 | 第22页 |
| ·球形马拉色菌脂肪酶的研究进展 | 第22-23页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 球形马拉色菌脂肪酶基因的克隆 | 第25-42页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·菌株与载体 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25-26页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第26-27页 |
| ·常用仪器 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-35页 |
| ·基因序列的分析及引物设计 | 第27-28页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第28-29页 |
| ·双酶消化及连接目的基因与 BSK 载体 | 第29-30页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 DH5α | 第30页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第30-32页 |
| ·合成 smg1 基因中错误碱基的修复 | 第32页 |
| ·毕赤酵母表达载体构建 | 第32-33页 |
| ·毕赤酵母重组表达菌株的构建与筛选 | 第33-34页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第34-35页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-41页 |
| ·球形马拉色菌脂肪酶 smg1 基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·球形马拉色菌脂肪酶 smg1 基因的测序及修复 | 第37-38页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·毕赤酵母重组表达菌株的筛选 | 第39-41页 |
| ·毕赤酵母重组表达 SMG1 的酶活 | 第41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 毕赤酵母重组表达球形马拉色菌 SMG1 的发酵条件优化 | 第42-53页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·材料与设备 | 第42页 |
| ·实验菌株 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·菌株的活化与发酵培养 | 第42-43页 |
| ·脂肪酶活力检测 | 第43页 |
| ·生长曲线的测定 | 第43页 |
| ·中心组合设计 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-51页 |
| ·重组毕赤酵母 SMG1 的最适发酵时间确定 | 第44-45页 |
| ·回归方程分析 | 第45页 |
| ·响应面回归方程分析及各因素对酶活的影响 | 第45-51页 |
| ·最佳培养条件的验证 | 第51页 |
| ·本章小结 | 第51-53页 |
| 第四章 脂肪酶 SMG1 的纯化与性质研究 | 第53-68页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·试剂和仪器 | 第53-54页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·酶活检测方法及蛋白浓度测定方法 | 第54页 |
| ·蛋白纯化方法 | 第54-55页 |
| ·温度对重组 SMG1 的酶活及稳定性的影响 | 第55页 |
| ·pH 对重组 SMG1 的酶活及稳定性的影响 | 第55-56页 |
| ·各种金属离子、表面活性剂和有机溶剂对重组 SMG1 的影响 | 第56页 |
| ·SMG1 冻干粉的制备 | 第56页 |
| ·重组 SMG1 对甘油酯的水解特异性 | 第56-57页 |
| ·重组 SMG1 的酯化特性 | 第57页 |
| ·HPLC 检测方法 | 第57页 |
| ·酸价滴定方法 | 第57页 |
| ·实验结果与讨论 | 第57-67页 |
| ·重组 SMG1 的纯化 | 第57-58页 |
| ·温度对重组 SMG1 的活性及稳定性的影响 | 第58-59页 |
| ·pH 对重组 SMG1 的活性和稳定性的影响 | 第59-61页 |
| ·各种金属离子、表面活性剂及有机溶剂对重组 SMG1 酶活的影响 | 第61-63页 |
| ·重组 SMG1 对甘油酯的水解特异性 | 第63-64页 |
| ·重组 SMG1 的酯化性质 | 第64-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 结论与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附件 | 第78页 |
