| 致谢 | 第1-10页 |
| 内容摘要 | 第10-11页 |
| Summery | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·植酸 | 第13-15页 |
| ·植酸的分布 | 第13页 |
| ·植酸的性质和结构 | 第13页 |
| ·植酸的抗营养作用 | 第13-15页 |
| ·影响磷的消化与吸收 | 第13-14页 |
| ·影响矿物元素的利用 | 第14页 |
| ·影响蛋白质吸收及消化酶的活性 | 第14-15页 |
| ·植酸抗营养作用的消除 | 第15页 |
| ·植酸酶 | 第15-19页 |
| ·植酸酶的来源 | 第15页 |
| ·植酸酶的分类 | 第15-16页 |
| ·植酸酶的作用机理 | 第16-17页 |
| ·植酸酶的酶学特性 | 第17-18页 |
| ·植酸酶的酶活测定 | 第18页 |
| ·植酸酶的功能 | 第18-19页 |
| ·植酸酶的研究进展 | 第19-25页 |
| ·植酸酶的高级结构 | 第19-20页 |
| ·植酸酶基因 | 第20-21页 |
| ·真菌植酸酶基因的分子生物学研究 | 第21-22页 |
| ·真菌植酸酶基因的分子生物学征 | 第21-22页 |
| ·真菌植酸酶基因ORF编码的多肽、信号肽及其糖基化位点 | 第22页 |
| ·植酸酶的基因工程 | 第22-25页 |
| 第二章 无花果曲霉生产的植酸酶酶活特性的研究 | 第25-36页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·仪器设备 | 第25页 |
| ·菌种与质粒 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·溶液配制 | 第25-26页 |
| ·方法和步骤 | 第26-31页 |
| ·无花果曲霉培养 | 第26-27页 |
| ·发酵培养 | 第27页 |
| ·取样 | 第27页 |
| ·标准磷测定曲线的制作 | 第27-28页 |
| ·植酸酶活性的测定 | 第28-29页 |
| ·纯化 | 第29页 |
| ·盐析 | 第29页 |
| ·透析 | 第29页 |
| ·离子交换剂的层析处理 | 第29-30页 |
| ·利用SDS-PAGE电泳测定层析前和层析后的酶纯度的情况 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的配制 | 第30-31页 |
| ·电泳样品的制备与处理 | 第31页 |
| ·染色及脱色 | 第31页 |
| ·不同温度测酶活 | 第31页 |
| ·不同pH值测酶活 | 第31页 |
| ·数据处理 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-34页 |
| ·无花果曲霉产植酸酶随生长时间的变化 | 第31-32页 |
| ·不同温度对无花果曲霉植酸酶酶活的影响 | 第32-33页 |
| ·不同pH值对无花果曲霉植酸酶酶活的影响 | 第33页 |
| ·无花果曲霉植酸酶纯化后的酶纯度检测 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| ·无花果曲霉的应用 | 第34-35页 |
| ·无花果曲霉植酸酶的酶学特性应用 | 第35页 |
| ·植酸酶活性的测定方法 | 第35-36页 |
| 第三章 植酸酶基因的克隆及鉴定 | 第36-52页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·仪器设备 | 第36页 |
| ·菌种与质粒 | 第36页 |
| ·酶与试剂 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·溶液配制 | 第36-37页 |
| ·方法和步骤 | 第37-42页 |
| ·无花果曲霉(A.ficuum)总DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·植酸酶cDNA的克隆 | 第38-42页 |
| ·PCR引物设计 | 第38页 |
| ·PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第39页 |
| ·植酸酶基因与PUCm-T载体的连接 | 第39-40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40页 |
| ·克隆植酸酶DNA片段的鉴定 | 第40-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-50页 |
| ·植酸酶重组克隆的蓝白斑筛选 | 第42-43页 |
| ·植酸酶重组克隆的鉴定 | 第43-44页 |
| ·克隆基因片段的序列分析 | 第44-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·植酸酶基因的分离及意义 | 第50-51页 |
| ·植酸酶氨基酸序列分析 | 第51-52页 |
| 第四章 植酸酶基因原核pIAβ8表达载体的构建 | 第52-59页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·仪器设备 | 第52页 |
| ·菌种与质粒 | 第52页 |
| ·质粒pIAβ8的物理图谱 | 第52页 |
| ·酶与试剂 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52-53页 |
| ·溶液配制 | 第53页 |
| ·方法和步骤 | 第53-56页 |
| ·植酸酶基因原核表达载体pIAβ8的构建 | 第53-56页 |
| ·植酸酶基因的回收 | 第53-54页 |
| ·原核表达载体质粒pIAβ8双酶切大片段的回收 | 第54页 |
| ·植酸酶基因和原核表达载体质粒pIAβ8的连接 | 第54-55页 |
| ·连接产物的转化 | 第55页 |
| ·重组载体质粒的鉴定 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-58页 |
| ·植酸酶重组克隆的蓝白斑筛选 | 第56页 |
| ·植酸酶重组克隆的鉴定 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 植酸酶基因真核pGAPZαA表达载体的构建 | 第59-67页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·仪器设备 | 第59页 |
| ·菌种与质粒 | 第59页 |
| ·质粒pGAPZαA的物理图谱 | 第59页 |
| ·酶与试剂 | 第59-60页 |
| ·培养基 | 第60页 |
| ·溶液配制 | 第60页 |
| ·方法和步骤 | 第60-64页 |
| ·植酸酶基因真核表达载体的构建 | 第60-64页 |
| ·植酸酶基因的回收 | 第60-61页 |
| ·真核表达载体pGAPZαA质粒的回收 | 第61-62页 |
| ·植酸酶基因和真核表达载体质粒pGAPZαA的连接 | 第62页 |
| ·连接产物的转化 | 第62-63页 |
| ·重组载体质粒的鉴定 | 第63-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-66页 |
| ·植酸酶真核表达载体重组克隆的抗生素筛选 | 第64页 |
| ·植酸酶重组克隆的鉴定 | 第64-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| 第六章 植酸酶基因在不同表达载体中表达的酶活比较 | 第67-72页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·仪器设备 | 第67页 |
| ·菌种与质粒 | 第67页 |
| ·培养基 | 第67页 |
| ·溶液配制 | 第67页 |
| ·方法和步骤 | 第67-68页 |
| ·表达宿主菌的培养 | 第67-68页 |
| ·样品处理 | 第68页 |
| ·植酸酶酶活的测定 | 第68页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第68页 |
| ·数据处理 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-71页 |
| ·两种植酸酶基因重组表达载体分别在大肠杆菌中表达的植酸酶酶活比较 | 第68-69页 |
| ·两种植酸酶基因重组表达载体分别在大肠杆菌中表达的胞内植酸酶酶活比较 | 第69-70页 |
| ·两种基因重组表达载体分别在大肠杆菌中表达的植酸酶蛋白检测 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| 总结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
