| 提要 | 第1-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-40页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 流感病毒及其疫苗的研究进展 | 第15-40页 |
| 1 流感病毒的分子生物学特征 | 第15-24页 |
| ·流感病毒的形态结构 | 第15-16页 |
| ·流感病毒基因组及其编码蛋白质 | 第16-24页 |
| ·血凝素基因及其编码蛋白质 | 第17-19页 |
| ·神经氨酸酶基因及其编码蛋白质 | 第19-20页 |
| ·核衣壳蛋白基因及编码的核蛋白 | 第20页 |
| ·基质蛋白基因及编码的基质蛋白 | 第20-22页 |
| ·编码RNA 聚合酶的基因片段 | 第22-23页 |
| ·NS 基因及其编码非结构蛋白 | 第23-24页 |
| 2 流感病毒的遗传变异 | 第24-27页 |
| ·病毒的复制及蛋白合成 | 第24页 |
| ·抗原性变异 | 第24-25页 |
| ·抗原漂移 | 第24-25页 |
| ·抗原转变 | 第25页 |
| ·病毒基因组变异 | 第25-27页 |
| ·基因重排 | 第26页 |
| ·互补 | 第26页 |
| ·表型混合和核衣壳移植 | 第26页 |
| ·重排抑制和突变抑制 | 第26-27页 |
| 3 流感疫苗的研究进展 | 第27-39页 |
| ·正在应用的流感疫苗 | 第27-30页 |
| ·全病毒灭活疫苗 | 第27-29页 |
| ·裂解疫苗 | 第29页 |
| ·亚单位型灭活疫苗 | 第29-30页 |
| ·研制中的流感疫苗 | 第30-37页 |
| ·减毒活疫苗 | 第31-32页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第32-33页 |
| ·核酸疫苗 | 第33-36页 |
| ·抗原表位疫苗 | 第36-37页 |
| ·其它 | 第37-39页 |
| ·细胞因子和佐剂疫苗 | 第37-38页 |
| ·反义基因工程疫苗 | 第38-39页 |
| 4 小结 | 第39-40页 |
| 第二章 研究内容 | 第40-113页 |
| 实验一 流感病毒T、B 细胞复合表位盒的筛选与构建 | 第40-55页 |
| 1 材料与方法 | 第40-42页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·HA 基因序列的选择 | 第40-41页 |
| ·序列分析软件 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·HA 基因序列的分析 | 第41页 |
| ·CTL 表位的分析 | 第41页 |
| ·Th 及B 细胞表位预测 | 第41页 |
| ·表位盒的设计 | 第41页 |
| ·表位盒的合成 | 第41-42页 |
| 2 结果 | 第42-52页 |
| ·HA 基因序列的分析 | 第42-43页 |
| ·CTL 表位的分析 | 第43-44页 |
| ·Th 及B 细胞表位预测 | 第44-49页 |
| ·Multipre（HMM）Th 表位预测结果 | 第44-45页 |
| ·PREDICTED ANTIGENIC PEPTIDES Th 表位预测结果 | 第45-46页 |
| ·BepiPred Th 表位预测结果 | 第46-49页 |
| ·H1 表位预测结果 | 第46-47页 |
| ·H7 表位预测结果 | 第47-48页 |
| ·H9HA 表位预测结果 | 第48-49页 |
| ·CTL T 细胞表位盒的构建 | 第49-50页 |
| ·表位盒的构成 | 第49-50页 |
| ·表位盒的构建 | 第50页 |
| ·PAProC 裂解预测结果 | 第50页 |
| ·Th 及B 细胞表位盒的构建 | 第50-51页 |
| ·表位盒的构成 | 第50页 |
| ·表位盒的构成 | 第50-51页 |
| ·表位盒的合成 | 第51-52页 |
| ·CTL T 细胞表位盒 | 第51页 |
| ·Th 及B 细胞表位盒 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| ·表位疫苗的选择 | 第52-53页 |
| ·表位的分析与选择 | 第53-54页 |
| 4 小结 | 第54-55页 |
| 实验二 多价多表位流感病毒核酸疫苗的构建 | 第55-84页 |
| 1 材料与方法 | 第56-72页 |
| ·材料 | 第56-58页 |
| ·菌株、质粒、细胞和病毒 | 第56页 |
| ·酶与试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·各种溶液及培养基 | 第56-58页 |
| ·方法 | 第58-72页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第58页 |
| ·质粒DNA 的转化 | 第58-59页 |
| ·质粒的提取与定量 | 第59-60页 |
| ·质粒的小量制备 | 第59页 |
| ·质粒的大量制备 | 第59-60页 |
| ·质粒DNA 的定量 | 第60页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第60-61页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第61页 |
| ·DNA 片段的回收 | 第61-62页 |
| ·外源DNA 片段与载体的连接反应 | 第62页 |
| ·DNA 重组子筛选及酶切鉴定 | 第62页 |
| ·目的基因的制备 | 第62-64页 |
| ·流感病毒复合多表位基因的分子设计及合成.. | 第62页 |
| ·H5HA 基因的克隆 | 第62-64页 |
| ·H3HA 基因的人工合成 | 第64页 |
| ·NP 基因的克隆 | 第64页 |
| ·流感病毒复合多表位DNA 重组体的构建 | 第64-71页 |
| ·基因改造 | 第64页 |
| ·DNA 重组体pVAX1-H5HA 的构建 | 第64-65页 |
| ·DNA 重组体pVAX1-H3HA1 的构建 | 第65-66页 |
| ·DNA 重组体pVAX1-NP 的构建 | 第66-67页 |
| ·复合多表位DNA 重组体pVAX1-H5HA-H3HA1 的构建 | 第67-68页 |
| ·复合多表位DNA重组体pVAX1-NP-Epi I的构建 | 第68-69页 |
| ·复合多表位 DNA 重组体pVAX1-H5HA-EpiII-H3HA1-M2e 的构建 | 第69-71页 |
| ·流感病毒复合多表位DNA 重组体的酶切鉴定 | 第71-72页 |
| 2 结果 | 第72-81页 |
| ·目的基因的制备结果 | 第72-79页 |
| ·引物设计结果 | 第72-73页 |
| ·M2e 基因核苷酸序列及其推导编码的氨基酸序列. | 第73-74页 |
| ·H5HA 基因RT-PCR 结果 | 第74-76页 |
| ·H3HA1 基因核苷酸序列及其推导编码的氨基酸序列 | 第76-77页 |
| ·NP 基因RT-PCR 结果 | 第77-79页 |
| ·DNA 重组体的酶切鉴定结果 | 第79-81页 |
| 3 讨论 | 第81-83页 |
| ·流感病毒流行特点 | 第81-82页 |
| ·核酸疫苗载体的选择 | 第82页 |
| ·表位疫苗的优点 | 第82-83页 |
| ·流感病毒复合多表位疫苗的设计 | 第83页 |
| 4 小结 | 第83-84页 |
| 实验三 多价多表位核酸疫苗的表达 | 第84-95页 |
| 1 材料与方法 | 第84-88页 |
| ·材料 | 第84-86页 |
| ·菌株、质粒、细胞和病毒 | 第84-85页 |
| ·酶与试剂 | 第85页 |
| ·主要仪器 | 第85页 |
| ·各种溶液及培养基 | 第85-86页 |
| ·方法 | 第86-88页 |
| ·目的基因的制备 | 第86-87页 |
| ·重组体转染细胞 | 第87页 |
| ·重组质粒表达产物的检测 | 第87-88页 |
| ·重组体的RT-PCR 鉴定 | 第87-88页 |
| ·感病毒复合多表位 DNA 重组体间接免疫荧光法检测 | 第88页 |
| 2 结果 | 第88-91页 |
| ·引物设计结果 | 第88-89页 |
| ·DNA 重组体导入Hela 细胞的结果 | 第89页 |
| ·DNA 重组体转染细胞的RT-PCR 检测 | 第89-90页 |
| ·DNA 重组体pVAX1-NP-Epi I 转染细胞的RT-PCR 检测 | 第89-90页 |
| ·DNA 重组体pVAX1-H5HA-Epi II-H3HA1-M2e 转染细胞的RT-PCR 检测 | 第90页 |
| ·DNA 重组体的IFA 检测结果 | 第90-91页 |
| 3 讨论 | 第91-94页 |
| ·基因转染的方法 | 第91-92页 |
| ·表达效率的提高 | 第92页 |
| ·目的蛋白的表达检测 | 第92-94页 |
| ·基因的共表达 | 第94页 |
| 4 小结 | 第94-95页 |
| 实验四 多价多表位流感病毒基因重组体小鼠实验免疫研究 | 第95-113页 |
| 1 材料与方法 | 第95-101页 |
| ·材料 | 第95-97页 |
| ·菌株、质粒、细胞和病毒 | 第95页 |
| ·酶与试剂 | 第95-96页 |
| ·主要仪器 | 第96页 |
| ·各种溶液及培养基 | 第96-97页 |
| ·实验动物 | 第97页 |
| ·方法 | 第97-101页 |
| ·流感病毒复合多表位 DNA 重组体的大量制备和纯化 | 第97-98页 |
| ·实验分组、小鼠免疫及采样 | 第98页 |
| ·ELISA 试剂盒测定免疫小鼠血清中流感病毒HA 抗体水平 | 第98-99页 |
| ·细胞介导的免疫应答检测 | 第99-101页 |
| ·脾脏单淋巴细胞悬液制备 | 第99页 |
| ·脾脏T 淋巴细胞转化试验（WST 法) | 第99页 |
| ·脾T 淋巴细胞亚类数量的检测 | 第99-100页 |
| ·ELISpot IFN-γ检测 | 第100-101页 |
| 2 结果 | 第101-110页 |
| ·ELISA 抗体检测结果 | 第101-105页 |
| ·各免疫组小鼠抗H5HA 抗体检测 | 第101-103页 |
| ·各免疫组小鼠抗H3HA 抗体检测 | 第103-104页 |
| ·各免疫组小鼠抗H1HA、H7HA、H9HA 抗体检测 | 第104-105页 |
| ·细胞免疫检测结果 | 第105-110页 |
| ·脾脏T 淋巴细胞增殖试验结果 | 第105-107页 |
| ·T 细胞亚类数量的检测结果 | 第107-108页 |
| ·免疫小鼠脾脏T 淋巴细胞IFN-γ的分泌检测 | 第108-110页 |
| 3 讨论 | 第110-112页 |
| ·DNA 重组体体液免疫效果评价 | 第110页 |
| ·DNA 重组体细胞免疫效果评价 | 第110-112页 |
| 4 小结 | 第112-113页 |
| 结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 中文摘要 | 第127-129页 |
| 英文摘要 | 第129-131页 |
