| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词中英文对照 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| 1 昆虫体内存在多种乙酰胆碱酯酶 | 第13-19页 |
| ·果蝇体内只存在一种ace基因 | 第14页 |
| ·尖音库蚊体内两个ace基因的存在 | 第14页 |
| ·冈比亚按蚊体内两个ace基因的存在 | 第14页 |
| ·蚜虫及其他农业害虫体内存在多种ace基因 | 第14-18页 |
| ·昆虫乙酰胆碱酯酶基因分子进化分析 | 第18-19页 |
| 2 乙酰胆碱酯酶与昆虫抗药性关系 | 第19-23页 |
| ·AChE的动力学参数 | 第19-20页 |
| ·两种乙酰胆碱酯酶与昆虫抗药性 | 第20-22页 |
| ·AChE量变与昆虫抗药性 | 第22-23页 |
| 3 家蚕中两个乙酰胆碱酯酶基因研究进展 | 第23-27页 |
| ·家蚕两个乙酰胆碱酯酶基因的发现及基因结构 | 第23-24页 |
| ·家蚕两个乙酰胆碱酯酶基因cDNA序列及推导的蛋白序列 | 第24-26页 |
| ·家蚕ace基因氨基酸序列与其他物种相似性比对 | 第26-27页 |
| 4 家蚕的研究简介 | 第27-28页 |
| ·家蚕生物学特性 | 第27页 |
| ·家蚕饲养环境简介 | 第27-28页 |
| ·严格控制温湿度 | 第27-28页 |
| ·严格消毒防病 | 第28页 |
| ·家蚕对农药的敏感性 | 第28页 |
| 5 定量PCR研究技术应用现状及前景 | 第28-32页 |
| ·Real-time qPCR技术原理 | 第29-30页 |
| ·Real-time PCR技术实验方法 | 第30-32页 |
| ·SYBR green Ⅰ染料法 | 第30-31页 |
| ·TaqMan系统 | 第31页 |
| ·分子信标(molecular beacon) | 第31-32页 |
| 6 本研究目的和意义 | 第32-33页 |
| 7 研究内容及技术路线 | 第33-35页 |
| 第二章 家蚕两种乙酰胆碱酯酶基因的表达谱分析 | 第35-55页 |
| 1 材料与方法 | 第37-44页 |
| ·昆虫饲养及试虫材料提取 | 第37页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-38页 |
| ·总RNA提取和cDNA合成 | 第38-39页 |
| ·总RNA提取 | 第38-39页 |
| ·cDNA合成 | 第39页 |
| ·PCR引物 | 第39-40页 |
| ·RT-PCR | 第40-41页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第41页 |
| ·连接反应 | 第41页 |
| ·连接产物的转化 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的提取及检测 | 第42页 |
| ·序列测定与分析 | 第42-43页 |
| ·定量PCR分析 | 第43-44页 |
| ·定量PCR | 第43页 |
| ·计算方法 | 第43-44页 |
| ·统计方法 | 第44页 |
| 2 实验结果 | 第44-52页 |
| ·荧光定量PCR产物熔解曲线及扩增效率一致性分析 | 第44-46页 |
| ·两种乙酰胆碱酯酶基因在家蚕不同龄期表达情况 | 第46-48页 |
| ·两种乙酰胆碱酯酶存在于各个龄期 | 第46页 |
| ·Bm-ace2表达量高于Bm-ace1 | 第46页 |
| ·两种乙酰胆碱酯酶基因在不同发育阶段各自的表达趋势有差异 | 第46-48页 |
| ·在三龄幼虫不同日龄试虫中两种乙酰胆碱酯酶基因表达情况 | 第48-50页 |
| ·RT-PCR验证两个乙酰胆碱酯酶基因的存在 | 第48页 |
| ·荧光定量PCR测定三龄幼虫两种乙酰胆碱酯酶表达量情况 | 第48-50页 |
| ·在家蚕组织中两种乙酰胆碱酯酶基因表达情况 | 第50-52页 |
| ·两种乙酰胆碱酯酶在特异组织特性表达 | 第50页 |
| ·两种乙酰胆碱酯酶在特异组织中表达量分析 | 第50页 |
| ·Bm-ace2表达量在不同组织中均高与Bm-ace1 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 两种乙酰胆碱酯酶蛋白生化测定 | 第55-61页 |
| 1 材料与方法 | 第56-57页 |
| ·昆虫饲养及材料获取 | 第56页 |
| ·试验仪器及试剂 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·仪器 | 第56页 |
| ·酶动力学参数测定 | 第56-57页 |
| ·统计方法 | 第57页 |
| 2 实验结果 | 第57-59页 |
| ·酶活力测定 | 第57-58页 |
| ·双倒数曲线测定Km、V_(max)值 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 两种乙酰胆碱酯转录因子结合位点生物信息学分析 | 第61-67页 |
| 1 材料与方法 | 第62-63页 |
| ·序列获取 | 第62-63页 |
| 2 实验结果 | 第63-65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 附录:攻读硕士学位期间学术论文的发表情况 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
