| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| ·免疫佐剂在动物医学上的应用 | 第12-14页 |
| ·动物免疫佐剂概述 | 第12-13页 |
| ·新型免疫佐剂的研究进展 | 第13-14页 |
| ·甲壳素、壳聚糖的概述 | 第14-17页 |
| ·甲壳素、壳聚糖的基本结构和性质 | 第14-15页 |
| ·甲壳素及其衍生物的研究概况 | 第15-16页 |
| ·壳聚糖作为药物缓控释剂的开发前景 | 第16-17页 |
| ·冠状病毒核衣壳蛋白概述 | 第17-18页 |
| ·冠状病毒核衣壳蛋白的结构和功能 | 第17页 |
| ·冠状病毒核衣壳蛋白的保守性和免疫原性 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 壳聚糖微球的制备 | 第19-24页 |
| ·材料和方法 | 第19-20页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·仪器设备 | 第19页 |
| ·壳聚糖的纯化 | 第19-20页 |
| ·乳化交联法制备壳聚糖微球 | 第20页 |
| ·壳聚糖微球的结构表征测定方法 | 第20页 |
| ·结果 | 第20-22页 |
| ·壳聚糖的纯化 | 第20页 |
| ·壳聚糖微球的表征 | 第20-22页 |
| ·讨论 | 第22-24页 |
| 第三章 截短型 BCV N 基因的克隆、原核表达及纯化 | 第24-35页 |
| ·材料和方法 | 第24-25页 |
| ·基因合成 | 第24页 |
| ·载体和菌株 | 第24页 |
| ·生化试剂和试剂盒 | 第24页 |
| ·主要仪器和设备 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·BCVN 基因重组原核表达载体 PET-30A/BCVN 的构建 | 第25-27页 |
| ·BCVN 基因的获得 | 第25页 |
| ·表达载体pET-30a 和 BCVN 基因的酶切处理 | 第25页 |
| ·目的基因与表达载体酶切后的纯化 | 第25-26页 |
| ·BCV-N 基因与表达载体pET-30a 的连接 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第26页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第26-27页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的诱导和表达 | 第27页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第27页 |
| ·诱导后菌液的处理及表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第27页 |
| ·表达产物的纯化 | 第27-28页 |
| ·阳性菌液的大量诱导及处理 | 第27页 |
| ·电洗脱方法提纯 BCVN 蛋白 | 第27-28页 |
| ·BCVN 蛋白的浓度测定 | 第28页 |
| ·针对多聚组氨酸标签的 Western blot 分析 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-32页 |
| ·基因合成 BCV N 基因的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·BCV N 基因重组原核表达载体pET-30a 的构建 | 第29页 |
| ·pET-30a/BCV N 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·薄层凝胶扫描测定 BCV N 蛋白的表达量 | 第30页 |
| ·PET-30A/BCV N 蛋白的电洗脱纯化 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌表达的 BCV N 蛋白的 Western blot 分析 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-35页 |
| ·BCV N 基因序列及抗原性分析 | 第32页 |
| ·BCV N 蛋白作为模式抗原的优越性分析 | 第32-35页 |
| 第四章 壳聚糖微球包埋 N 蛋白及其免疫效果评价 | 第35-42页 |
| ·材料和方法 | 第35页 |
| ·材料和试剂 | 第35页 |
| ·仪器设备 | 第35页 |
| ·壳聚糖微球包埋 N 蛋白的方法 | 第35-36页 |
| ·BCV N 蛋白浓度的测定 | 第35-36页 |
| ·壳聚糖微球包埋 N 蛋白的过程 | 第36页 |
| ·包封率和载药量的计算 | 第36页 |
| ·BCV N 蛋白抗体间接 ELISA 检测方法的建立 | 第36-37页 |
| ·抗原最佳包被浓度的测定 | 第36页 |
| ·间接 ELISA 操作术式 | 第36-37页 |
| ·动物试验 | 第37页 |
| ·试验动物及分组 | 第37页 |
| ·免疫途径和方法 | 第37页 |
| ·免疫接种时间和采血时间 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-40页 |
| ·壳聚糖包埋 N 蛋白的包封率和载药量 | 第37-38页 |
| ·抗原最佳包被浓度的标准曲线 | 第38-39页 |
| ·免疫接种动物的抗体动态 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·载药量和包封率对药物缓释作用的影响 | 第40页 |
| ·壳聚糖微球的缓释效果分析 | 第40-41页 |
| ·壳聚糖新型佐剂的应用和展望 | 第41-42页 |
| 第五章 全文结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简历 | 第48页 |
