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绿茶及其提取物与抗生素合用抗MRSA的作用及机制研究

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-11页
符号表(缩略语)第11-21页
第一章 前言第21-22页
第二章 MRSA 对抗菌药物的耐药表型和基因型分析第22-45页
 1 材料第22-24页
   ·菌株来源第22-23页
     ·实验菌株第22-23页
     ·质控菌株第23页
     ·阳性对照菌第23页
   ·试剂第23页
     ·细菌培养基第23页
     ·抗生素和消毒剂第23页
     ·引物和PCR 试剂第23页
   ·仪器第23-24页
 2. 方法第24-29页
   ·最低抑菌浓度测定第24-25页
     ·抗菌药物的配制第24页
     ·含药琼脂的制备第24页
     ·菌悬液的制备第24页
     ·接种第24-25页
     ·孵育第25页
     ·结果判断第25页
   ·PCR 扩增耐药基因第25-27页
     ·普通肉汤的制备第26页
     ·TE 缓冲液第26页
     ·TAE 电泳缓冲液第26页
     ·溴化乙锭(EB)贮存液第26页
     ·基因DNA 模板液的提取第26-27页
     ·PCR 扩增第27页
   ·β-内酰胺酶的检测第27-29页
     ·头孢硝噻酚的配制第27页
     ·β-内酰胺酶的测定第27-29页
   ·数据统计第29页
 3. 结果第29-36页
   ·MRSA 对消毒防腐剂和抗生素的 MIC 值第29页
   ·MRSA 的耐药率统计差别第29-34页
   ·MRSA 的耐药基因和产β-内酰胺酶检测结果第34页
   ·细菌同时携带耐药基因的情况第34-35页
   ·mecA 基因和产β-内酰酶与β-内酰类抗生素耐药相关性第35页
   ·庆大霉素的MIC 与aac (6’)/aph(2”)和aph (3’) Ⅲ基因的相关性第35-36页
 4. 讨论第36-41页
 参考文献第41-45页
第三章 绿茶浸出物对MRSA 的抗菌作用及机制研究第45-74页
 1. 材料第45-47页
   ·菌株来源第45页
     ·实验菌株第45页
     ·质控菌株第45页
   ·试剂第45-46页
     ·细菌培养基第45-46页
     ·试剂第46页
   ·仪器第46-47页
 2. 方法第47-56页
   ·耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的筛选第47页
     ·苯唑西林溶液配制第47页
     ·含药琼脂的配制第47页
     ·菌液准备第47页
     ·细菌接种第47页
     ·细菌培养第47页
     ·观察结果第47页
   ·16株MRSA 和ATCC25923 的mecA 基因检测第47-49页
     ·TE 缓冲液的配制第47-48页
     ·DNA 的提取第48页
     ·PCR 引物和扩增试剂第48页
     ·PCR 扩增第48页
     ·TAE 电泳缓冲液的配制第48-49页
     ·琼脂糖凝胶电泳第49页
   ·β-内酰胺酶的测定第49页
     ·头孢硝噻酚的配制第49页
     ·β-内酰胺酶的测定第49页
   ·茶叶浸出物和提取物对MRSA的MIC测定第49-50页
     ·细菌的准备第49页
     ·茶叶浸出物的配制第49-50页
     ·茶叶提取物溶液的配制第50页
     ·含药琼脂的制备第50页
     ·菌液准备第50页
     ·细菌接种第50页
     ·孵育第50页
     ·结果判断第50页
   ·绿茶浸出物与抗生素合用对MRSA 的抑菌试验第50-52页
     ·绿茶浸出物配制第50页
     ·细菌准备第50-51页
     ·细菌悬液的配制第51页
     ·纸片准备第51页
     ·M-H 琼脂的准备第51页
     ·抗生素溶液的配制第51页
     ·含菌平板的制作第51页
     ·含药纸片的制作第51页
     ·细菌培养第51页
     ·抑菌圈的测定第51-52页
   ·茶叶提取物与β-内酰胺类抗生素的协同试验第52-53页
     ·抗菌药物溶液的配制第52页
     ·细菌准备第52页
     ·细菌悬液的配制第52页
     ·纸片准备第52页
     ·M-H 琼脂的准备第52页
     ·含菌平板的制作第52页
     ·含药纸片的制作第52页
     ·细菌培养第52页
     ·抑菌圈的测定第52-53页
   ·绿茶浸出物-NaCl 渗透试验第53页
     ·绿茶浸出物准备第53页
     ·细菌准备第53页
     ·NaCl-绿茶浸出物-菌悬液制备第53页
     ·比色第53页
     ·曲线绘制第53页
   ·绿茶-蒸馏水渗透试验第53-54页
     ·绿茶浸出物准备第53页
     ·细菌准备第53页
     ·绿茶浸出物的菌悬液配制第53-54页
     ·菌落计数第54页
     ·曲线绘制第54页
   ·HPLC 测定绿茶及其提取物对头孢唑啉在金葡菌菌体内蓄积的影响第54-56页
     ·色谱条件第54页
     ·配制液体第54-55页
     ·实验分组第55页
     ·样品处理第55页
     ·标准曲线制作第55-56页
     ·回收率测定第56页
     ·精密度测定第56页
 3. 结果第56-67页
   ·耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的筛选第56页
   ·MRSA 和ATCC25923的mecA 基因检测第56页
   ·β-内酰胺酶的测定第56-57页
   ·茶叶浸出物和提取物 MRSA 的 MIC 测定第57-58页
     ·茶叶浸出物对 MRSAMIC 结果第57-58页
     ·茶叶提取物对 MRSAMIC 结果第58页
   ·绿茶浸出液与抗生素合用MRSA 的抑菌试验第58-59页
   ·茶叶提取物与β-内酰胺类抗生素的协同试验第59-60页
   ·MRSA 的绿茶浸出物-NaCl 渗透试验第60页
   ·MRSA 的绿茶-蒸馏水渗透试验第60-63页
   ·HPL 测定绿茶及其提取物对头孢唑啉在金葡菌菌体内蓄积的影响第63-67页
     ·标准曲线第63-64页
     ·MRSA 和ATCC 菌体内头孢唑啉的浓度第64-67页
 4. 讨论第67-71页
 参考文献第71-74页
第四章 ECg/EGC与β-内酰胺类抗生素对 MRSA的协同抗菌机制研究第74-94页
 1. 材料第74-75页
   ·菌株来源第74页
     ·实验菌株第74页
     ·质控菌株第74页
   ·试剂第74-75页
     ·细菌培养基第74-75页
     ·绿茶和试验所用的药物第75页
   ·试验仪器第75页
 2. 方法第75-84页
   ·ECg、EGCg 与β-内酰胺类抗生素的协同试验第75-78页
     ·ECg E、GCg 和β-内酰胺类抗生素的MIC 测定第75-76页
     ·ECg/EGCg 与β-内酰胺类抗生素的协同试验第76-78页
     ·RT- PCR 技术检测基因lytM、lgrA 的表达变化第78-79页
     ·细菌培养第78页
     ·RNA 的提取第78页
     ·cDNA 第一链的合成第78页
     ·PCR 的扩增第78-79页
     ·TAE 电泳缓冲液配制第79页
     ·DNA 电泳第79页
     ·定量比较第79页
   ·WB 法测定EGCgMRSA 的PBP2a 蛋白的影响第79-83页
   ·EGCg 对MRSA 的自溶酶影响第83-84页
     ·热杀灭菌的制备第83页
     ·自溶酶的提取第83页
     ·自溶酶的电泳第83页
     ·自溶酶缓冲液的配制第83页
     ·自溶酶的孵育第83-84页
     ·胶的染色和扫描第84页
   ·EGg/EGCg 对金葡菌β-内酰胺酶的抑制作用第84页
     ·β-内酰胺酶的制备第84页
     ·ECg、EGCg 和三唑巴坦对β-内酰胺酶的抑制作用第84页
     ·计算作图第84页
 3. 实验结果第84-90页
   ·ECg、EGCg 与β-内酰胺类抗生素的协同试验第84-85页
   ·RT- PCR 技术检测基因lytM、lgrA 的表达变化第85-88页
   ·Western blot 法测定EGCgMRSAPBP2a 蛋白的影响第88-89页
   ·EGCg 对 MRSA 自溶酶的影响第89页
   ·EGCg/ECg 对金葡菌β-内酰胺酶的抑制作用第89-90页
 4. 讨论第90-92页
 参考文献第92-94页
第五章 表儿茶素没食子酸酯抑制金葡菌四环素外排泵研究第94-108页
 1. 材料第94-95页
   ·菌株来源第94页
     ·实验菌株第94页
     ·质控菌株第94页
   ·实验仪器第94-95页
   ·试剂第95页
     ·细菌培养基第95页
     ·试验试剂第95页
 2. 方法第95-100页
   ·ECg E、GCg 和四环素的MIC 测定第95-96页
     ·细菌的准备第95页
     ·MH 肉汤的配制第95页
     ·ECg、EGCg 和四环素储备液的配制第95-96页
     ·抗生素溶液的稀释第96页
     ·细菌接种第96页
     ·细菌培养第96页
     ·结果观察第96页
   ·ECg 与四环素的协同试验第96-97页
     ·细菌准备第96页
     ·MH 肉汤的配制第96-97页
     ·ECg 和四环素储备液的配制第97页
     ·抗生素溶液的稀释第97页
     ·细菌接种第97页
     ·细菌培养第97页
     ·结果观察第97页
   ·TetK 耐药泵阳性和阴性株的筛选第97-99页
     ·TE 缓冲液的配制第97页
     ·DNA 的提取第97-98页
     ·PCR 扩增第98页
     ·TAE 电泳缓冲液的配制第98页
     ·琼脂糖凝胶电泳第98-99页
     ·荧光法测定ECg 和EGCg 对tetK 外排泵的抑制作用第99-100页
     ·镁离子缓冲液配制第99页
     ·ECg和EGCg对金葡菌tetK外排泵的影响第99页
     ·ECg 和EGCg 对原生质金葡菌tetK 外排泵的影响第99页
     ·去ECg/EGCg后tetK 外排泵对四环素的外排作用第99-100页
 3. 实验结果第100-104页
   ·ECg 和四环素对 MRSA 的协同抗菌作用第100页
   ·TetK 耐药泵阳性和阴性株的筛选第100-101页
   ·荧光法测定ECg/EGCgtet 外排泵的抑制作用第101-104页
     ·ECG/EGCG 对细胞壁完整的金葡菌的tetK 外排泵的影响第101-102页
     ·ECg/EGCg 对除细胞壁的金葡菌的tetK 外排泵的影响第102-103页
     ·去ECg/EGCg 后tetK 外排泵对四环素外排作用第103-104页
 4. 讨论第104-106页
 参考文献第106-108页
结论第108-109页
综述第109-117页
致谢第117-118页
攻读硕士学位期间发表的论文第118页
本人简历第118页

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