| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 缩略语索引 | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第1章 L-精氨酸的研究进展及凝胶阻滞实验的原理和应用 | 第9-16页 |
| ·概述 | 第9页 |
| ·L-精氨酸的结构及性质 | 第9-10页 |
| ·L-精氨酸的功能及生产现状 | 第10-12页 |
| ·L-精氨酸的生物学功能 | 第10页 |
| ·L-精氨酸的生产现状及方法 | 第10-11页 |
| ·钝齿棒杆菌L-精氨酸的生物合成途径的研究 | 第11-12页 |
| ·ArgR的研究进展 | 第12-13页 |
| ·ArgR的特征 | 第12-13页 |
| ·ArgR的结构 | 第13页 |
| ·凝胶阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA) | 第13-15页 |
| ·选题的目的和意义 | 第15-16页 |
| 第2章 钝齿棒杆菌ArgR的克隆、表达 | 第16-33页 |
| ·前言 | 第16页 |
| ·材料与方法 | 第16-18页 |
| ·主要材料与仪器、试剂 | 第16-17页 |
| ·主要试剂的配制 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-26页 |
| ·钝齿棒杆菌基因组DNA的提取 | 第18页 |
| ·引物设计及PCR扩增 | 第18-19页 |
| ·目的基因的回收和纯化 | 第19-20页 |
| ·质粒的提取 | 第20页 |
| ·目的片段和质粒的酶切及产物回收 | 第20-21页 |
| ·酶切产物的回收 | 第21页 |
| ·目的片段和质粒pET22b(+)的连接反应 | 第21-22页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞(大肠杆菌DH5α) | 第22页 |
| ·重组质粒转入感受态大肠杆菌DH5α | 第22-23页 |
| ·阳性克隆子的验证 | 第23页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌BL21及验证 | 第23-24页 |
| ·目的基因的诱导表达及检测 | 第24页 |
| ·ArgR纯化条件的优化 | 第24-26页 |
| ·ArgR多克隆抗制备及抗体效价测定 | 第26页 |
| ·Western blotting检测ArgR活性 | 第26页 |
| ·结果与分析 | 第26-31页 |
| ·钝齿棒杆菌基因组DNA的提取及argR基因扩增 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆子的检测 | 第27-28页 |
| ·测序及结果分析 | 第28页 |
| ·ArgR的融合表达 | 第28-29页 |
| ·ArgR的纯化结果 | 第29-30页 |
| ·抗ArgR血清制备及活性验证结果 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第3章 EMSA检测ArgR与其操作子片段的结合反应 | 第33-49页 |
| ·前言 | 第33-34页 |
| ·实验材料与试剂 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-39页 |
| ·钝齿棒杆菌6个操作子片段的TA克隆 | 第34-37页 |
| ·Native-PAGE检测ArgR与各操作子片段的结合反应 | 第37-38页 |
| ·EMSA检测操作子片段和ArgR的结合能力 | 第38-39页 |
| ·实验结果与分析 | 第39-47页 |
| ·精氨酸生物合成相关基因操作子DNA片段的扩增及验证 | 第39页 |
| ·菌落PCR检测TA阳性克隆子结果 | 第39-41页 |
| ·测序及结果分析 | 第41页 |
| ·Native-PAGE检测ArgR与操作子DNA片段的结合 | 第41-43页 |
| ·EMSA检测操作子DNA片段和ArgR的结合能力 | 第43-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第4章 单增李斯特菌actA、inlB、p60的原核表达载体的构建 | 第49-59页 |
| ·前言 | 第49-50页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-55页 |
| ·actA、inlB、p60引物的设计 | 第51页 |
| ·单增李斯特菌基因组DNA的提取 | 第51页 |
| ·三个目的片段的扩增 | 第51-52页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第52-53页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第53页 |
| ·目的片段和质粒的酶切和连接 | 第53页 |
| ·酶切产物的回收 | 第53页 |
| ·目的片段与质粒载体的连接 | 第53-54页 |
| ·重组质粒转化(大肠杆菌DH5a) | 第54页 |
| ·阳性克隆子的鉴定 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第55-58页 |
| ·单增李斯特菌基因组DNA | 第55-56页 |
| ·PCR扩增actA,inlB以及p60全基因 | 第56页 |
| ·重组质粒的菌落PCR及酶切鉴定结果 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第5章 结论与展望 | 第59-61页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| ·蛋白ArgR表达载体的构建及表达 | 第59页 |
| ·EMSA检测ArgR与其操作子片段的结合反应 | 第59-60页 |
| ·单增生李斯特菌特异性膜蛋白表达载体的构建 | 第60页 |
| ·展望 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 个人简历 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-77页 |
| 附录A1 仪器设备 | 第67-68页 |
| 附录A2 试剂 | 第68-70页 |
| 附录B1 | 第70-71页 |
| 附录B2 | 第71-72页 |
| 附录C DNA测序结果 | 第72-77页 |
