鸭病毒性肝炎卵黄抗体检测方法的建立
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-18页 |
| 1 鸭病毒性肝炎概述 | 第10-14页 |
| ·DHV-Ⅰ的病原特性 | 第10-11页 |
| ·临床症状与病理变化 | 第11页 |
| ·DHV-Ⅰ诊断方法和技术研究进展 | 第11-14页 |
| ·中和试验 | 第11-12页 |
| ·琼脂凝胶扩散沉淀试验 | 第12页 |
| ·凝集试验 | 第12页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第12-13页 |
| ·胶体金标记 | 第13页 |
| ·荧光抗体 | 第13页 |
| ·分子生物学技术 | 第13-14页 |
| 2 卵黄免疫球蛋白概述 | 第14-18页 |
| ·IgY的形成 | 第14页 |
| ·IgY的结构、功能和优点 | 第14-16页 |
| ·IgY的分离纯化 | 第16页 |
| ·IgY的应用 | 第16-18页 |
| 研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 材料和方法 | 第19-31页 |
| 1 毒株 | 第19页 |
| 2 试验动物、样品 | 第19页 |
| 3 主要试剂 | 第19页 |
| 4 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 5 Ⅰ型鸭肝炎弱毒的增殖与纯化 | 第20-21页 |
| ·型鸭肝炎弱毒病毒的增殖 | 第20页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎弱毒病毒的纯化 | 第20-21页 |
| ·Ⅰ型鸭肝炎弱毒病毒纯度鉴定 | 第21页 |
| ·电镜观察 | 第21页 |
| ·病毒液蛋白含量测定 | 第21页 |
| 6 DHV-Ⅰ抗体阳性血清和阳性卵黄的制备 | 第21-22页 |
| ·动物免疫 | 第21页 |
| ·鸭抗DHV-Ⅰ血清的采集及保存 | 第21-22页 |
| 7 Ⅰ型鸭肝炎病毒抗体乳胶凝集检测方法的建立 | 第22-24页 |
| ·乳胶前处理 | 第22页 |
| ·LAT最佳工作浓度的确定及工作条件的优化 | 第22-23页 |
| ·致敏方法 | 第22页 |
| ·最佳致敏蛋白量的确定 | 第22页 |
| ·最佳致敏时间的选择 | 第22-23页 |
| ·最佳致敏温度的选择 | 第23页 |
| ·致敏乳胶的质量检验 | 第23-24页 |
| ·自凝性检验 | 第23页 |
| ·特异性试验 | 第23页 |
| ·阻断试验 | 第23页 |
| ·重复性试验 | 第23-24页 |
| ·保存期试验 | 第24页 |
| ·结果判定 | 第24页 |
| 8 鸭抗DHV-Ⅰ卵黄抗体的粗提与纯化 | 第24-26页 |
| ·鸭抗DHV-Ⅰ卵黄液的收取 | 第24页 |
| ·卵黄抗体的粗提 | 第24-25页 |
| ·稀释倍数和静置时间的确定 | 第24-25页 |
| ·处理条件的优化 | 第25页 |
| ·卵黄抗体的纯化 | 第25-26页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第25页 |
| ·透析脱盐 | 第25-26页 |
| ·卵黄抗体蛋白含量的测定 | 第26页 |
| 9 间接ELISA方法的建立 | 第26-31页 |
| ·抗原最佳包被浓度和抗体最佳工作浓度的确定 | 第26-28页 |
| ·包被抗原 | 第26页 |
| ·洗涤 | 第26-27页 |
| ·封闭 | 第27页 |
| ·加一抗 | 第27页 |
| ·加酶标二抗 | 第27页 |
| ·显色 | 第27页 |
| ·终止 | 第27页 |
| ·结果判定 | 第27-28页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第28页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第28页 |
| ·最佳一抗反应时间的确定 | 第28-29页 |
| ·最佳酶标二抗反应时间的确定 | 第29页 |
| ·最佳封闭条件的确定 | 第29页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第29页 |
| ·临界值的测定 | 第29-30页 |
| ·敏感性试验和特异性试验 | 第30页 |
| ·阻断试验 | 第30页 |
| ·重复性试验 | 第30页 |
| ·批内重复试验 | 第30页 |
| ·批间重复试验 | 第30页 |
| ·DHV-Ⅰ抗体LAT与ELISA初步应用的比较 | 第30-31页 |
| 结果与分析 | 第31-48页 |
| 1 Ⅰ型鸭肝炎弱毒的增殖与纯化结果 | 第31页 |
| 2 Ⅰ型鸭肝炎病毒抗体乳胶凝集检测方法的建立 | 第31-37页 |
| ·最佳致敏蛋白量的确定 | 第31页 |
| ·最佳致敏时间的确定 | 第31-33页 |
| ·最佳致敏温度的确定 | 第33页 |
| ·致敏乳胶的质量检验 | 第33-37页 |
| ·自凝性检验 | 第33页 |
| ·特异性试验 | 第33-34页 |
| ·阻断试验 | 第34-35页 |
| ·重复性试验 | 第35-36页 |
| ·保存期试验 | 第36-37页 |
| 3 鸭抗DHV-Ⅰ卵黄抗体的粗提与纯化 | 第37-39页 |
| ·卵黄抗体的粗提 | 第37-39页 |
| ·稀释倍数和静置时间的确定 | 第37-38页 |
| ·处理条件的优化 | 第38-39页 |
| ·卵黄抗体纯化后的蛋白含量 | 第39页 |
| 4 间接ELISA方法的建立 | 第39-48页 |
| ·最佳工作浓度的确定及工作条件的优化结果 | 第39-43页 |
| ·抗原最佳包被浓度和抗体最佳工作浓度的确定 | 第39-41页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第41页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第41页 |
| ·最佳一抗反应时间的确定 | 第41-42页 |
| ·最佳酶标二抗反应时间的确定 | 第42页 |
| ·最佳封闭条件的选择 | 第42页 |
| ·最佳显色时间的选择 | 第42-43页 |
| ·临界值的测定 | 第43页 |
| ·敏感性试验和特异性试验 | 第43-44页 |
| ·阻断试验 | 第44页 |
| ·批内重复试验和批间重复试验 | 第44页 |
| ·DHV-Ⅰ抗体LAT与ELISA初步应用的比较 | 第44-48页 |
| 讨论 | 第48-52页 |
| 1 关于DHV-Ⅰ病毒纯化 | 第48页 |
| 2 关于乳胶凝集检测方法 | 第48-49页 |
| 3 关于卵黄的处理 | 第49-51页 |
| 4 关于间接ELISA方法 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
