| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-33页 |
| ·α-法尼烯的代谢途径及其生物学功能 | 第15-20页 |
| ·α-法尼烯的代谢途径 | 第15-18页 |
| ·α-法尼烯的生物学功能 | 第18-20页 |
| ·α-法尼烯是一种挥发性香气成份 | 第18页 |
| ·α-法尼烯与昆虫的诱导性 | 第18-19页 |
| ·α-法尼烯与虎皮病 | 第19-20页 |
| ·RNAI 的研究进展 | 第20-24页 |
| ·RNAI 的发现 | 第21页 |
| ·RNAI 的作用机制 | 第21-22页 |
| ·RNAI 的应用 | 第22-24页 |
| ·作为植物基因功能研究的工具 | 第22页 |
| ·RNAi 可用作作物基因改良的工具 | 第22页 |
| ·RNAi 在疾病治疗中的应用 | 第22-23页 |
| ·RNAi 在动植物抗病毒中的应用 | 第23-24页 |
| ·农杆菌介导的苹果遗传转化的研究进展 | 第24-30页 |
| ·苹果基因转化的方法及供受体系统 | 第24页 |
| ·影响苹果叶片高效再生的因素 | 第24-27页 |
| ·基因型 | 第25页 |
| ·外植体 | 第25-26页 |
| ·培养条件 | 第26-27页 |
| ·抗生素 | 第27页 |
| ·影响转化的因素 | 第27-29页 |
| ·菌株 | 第27-28页 |
| ·侵染时间 | 第28页 |
| ·共培养 | 第28页 |
| ·酚类物质 | 第28页 |
| ·转化植株选择策略 | 第28-29页 |
| ·存在的问题及对策 | 第29-30页 |
| ·转化效率不高 | 第29页 |
| ·外源基因的表达强度不够 | 第29页 |
| ·转化的目的基因有限 | 第29页 |
| ·对转化植株的选择不够重视 | 第29-30页 |
| ·再生和转化的受体系统单一 | 第30页 |
| ·研究目的意义及前景展望 | 第30-33页 |
| ·研究目的意义 | 第30-31页 |
| ·前景展望 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-48页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·酶及生化试剂 | 第33页 |
| ·PCR 引物 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-48页 |
| ·TRIZOL 法提取苹果组培苗叶片总RNA | 第34-35页 |
| ·RNA 反转录 | 第35页 |
| ·青香蕉苹果Α-法尼烯合成酶表达载体的构建 | 第35-40页 |
| ·正义和反义表达载体的验证及其转化 | 第35-39页 |
| ·RNAi 表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·青香蕉苹果Α-法尼烯合成酶亚细胞定位的研究 | 第40-43页 |
| ·PCR 扩增α-法尼烯合成酶基因全长 | 第40-41页 |
| ·连接反应 | 第41页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA 及酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·序列测定 | 第42页 |
| ·目的片段插入到改造过的P81121-GFP 质粒载体 | 第42页 |
| ·农杆菌介导的亚细胞定位表达载体向洋葱表皮中的转化. | 第42-43页 |
| ·青香蕉苹果叶片高效再生体系的建立 | 第43-45页 |
| ·叶片接种培养 | 第43页 |
| ·培养条件 | 第43页 |
| ·叶片不同接种方式对再生的影响 | 第43页 |
| ·培养基中不同激素组合对叶片再生的影响 | 第43-44页 |
| ·暗培养时间对叶片再生的影响 | 第44页 |
| ·叶片成熟度对叶片再生的影响 | 第44页 |
| ·生根培养 | 第44页 |
| ·统计分析 | 第44-45页 |
| ·青香蕉苹果离体叶片农杆菌介导的遗传转化体系的建立 | 第45-48页 |
| ·卡那霉素选择压的确定 | 第45页 |
| ·农杆菌侵染时间的确定 | 第45页 |
| ·抑菌抗生素对青香蕉苹果离体叶片再生的影响 | 第45页 |
| ·抑菌抗生素浓度的确定 | 第45页 |
| ·叶片农杆菌介导青香蕉苹果的遗传转化方法 | 第45-46页 |
| ·农杆菌介导丰产梨的遗传转化方法 | 第46页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-67页 |
| ·正义、反义和RNAI 表达载体的构建 | 第48-53页 |
| ·正义表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·反义表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·RNAI 表达载体AFS-L-S 的构建 | 第50-53页 |
| ·Α–法尼烯合成酶亚细胞定位的研究 | 第53-56页 |
| ·PBI-AFS-GFP 亚细胞定位表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·融合蛋白荧光信号的检测 | 第55-56页 |
| ·青香蕉苹果高效再生体系的建立 | 第56-59页 |
| ·叶片不同接种方式对再生的影响 | 第56页 |
| ·培养基中不同激素组合对叶片再生的影响 | 第56-57页 |
| ·暗培养时间对叶片再生的影响 | 第57-58页 |
| ·叶片成熟度对叶片再生的影响 | 第58-59页 |
| ·生根培养基 | 第59页 |
| ·青香蕉苹果遗传转化体系的建立 | 第59-64页 |
| ·卡那霉素选择压的确定 | 第59-61页 |
| ·卡那霉素对叶片再生的影响 | 第59-60页 |
| ·卡那霉素对组培苗新梢增殖的影响 | 第60-61页 |
| ·农杆菌侵染时间的确定 | 第61页 |
| ·头孢霉素(CEF)对叶片再生的影响 | 第61-62页 |
| ·羧苄青霉素(CARB)对叶片再生的影响 | 第62-63页 |
| ·遗传转化过程中抑菌抗生素浓度的确定 | 第63-64页 |
| ·转基因植株和愈伤组织的初步获得 | 第64-67页 |
| ·青香蕉苹果转基因植株的初步获得 | 第64-65页 |
| ·丰产梨转基因植株的初步获得 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-71页 |
| ·青香蕉苹果α－法尼烯合成酶表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·构建正义、反义表达载体研究基因功能 | 第67页 |
| ·RNAI 表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·α-法尼烯合成酶亚细胞定位的研究 | 第68-69页 |
| ·青香蕉苹果再生体系的构建与转化 | 第69-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第84页 |
