| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-29页 |
| ·基因沉默的发现 | 第15页 |
| ·RNA 沉默的种类 | 第15-18页 |
| ·位置效应 | 第15-16页 |
| ·转录水平的基因沉默 | 第16-17页 |
| ·转录后基因沉默 | 第17-18页 |
| ·转录后基因沉默的分子机制 | 第18-20页 |
| ·基因沉默抑制子的发现 | 第20-21页 |
| ·基因沉默抑制子鉴定方法 | 第21-24页 |
| ·植物体系 | 第21-23页 |
| ·昆虫及动物细胞体系 | 第23-24页 |
| ·RNA 沉默抑制子的作用机理 | 第24-26页 |
| ·马铃薯X 病毒 P25 蛋白 | 第25页 |
| ·番茄丛矮病毒属 P19 蛋白 | 第25-26页 |
| ·RNA 沉默抑制子的应用 | 第26-28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2. 材料与方法 | 第29-47页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·毒源 | 第29页 |
| ·植株 | 第29页 |
| ·菌株、质粒 | 第29页 |
| ·其它试剂 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-47页 |
| ·禽类病毒的提纯及病毒RNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·cDNA 的合成及 PCR 扩增 | 第30-32页 |
| ·CTAB 法提取植物总 DNA | 第32-33页 |
| ·基因的克隆 | 第33-36页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达系统 | 第36-38页 |
| ·Western blot 检测 | 第38-39页 |
| ·Northern blot 检测 | 第39-44页 |
| ·热酚法（分离大小 RNA）提取植物 RNA | 第44-46页 |
| ·长波紫外灯观察 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-61页 |
| ·病毒的RNA 提取 | 第47页 |
| ·RT-PCR | 第47-48页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第48页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·P25 基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·PVX-P25 基因的扩增 | 第49-50页 |
| ·克隆载体的构建与鉴定 | 第50页 |
| ·P19 基因的克隆 | 第50-51页 |
| ·P19 基因的扩增 | 第50-51页 |
| ·克隆载体的构建与鉴定 | 第51页 |
| ·GFP 基因的克隆 | 第51-53页 |
| ·GFP 基因的扩增 | 第51-52页 |
| ·克隆载体的构建与鉴定 | 第52-53页 |
| ·双元表达载体的构建与鉴定 | 第53页 |
| ·pET-GFP 原核表达载体构建及 GFP 的 SDS-PAGE | 第53-55页 |
| ·抗血清制备、效价测定 | 第55页 |
| ·瞬时共表达 GFP 和候选沉默抑制子 | 第55-61页 |
| ·候选沉默抑制子 F 对 16c 沉默表型的影响 | 第55-56页 |
| ·候选沉默抑制子 HVT 对 16c 沉默表型的影响 | 第56-57页 |
| ·候选沉默抑制子 NS1 对 16c 沉默表型的影响 | 第57-58页 |
| ·候选沉默抑制子 NS1 对 16c 沉默表型的系统性影响 | 第58-59页 |
| ·GFP 蛋白 Western blot 分析结果 | 第59页 |
| ·GFP mRNA Northern blot 分析结果 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达的应用 | 第61页 |
| ·禽流感病毒 NS1 能够抑制 GFP 引起的局部性沉默 | 第61-62页 |
| ·禽流感病毒 NS1 不能抑制系统性沉默的发生 | 第62-63页 |
| ·新城疫病毒 F、火鸡疱疹病毒 HVT 的瞬时表达不能抑制 GFP 局部性沉默 | 第63页 |
| ·病毒致病相关蛋白与沉默抑制子的关系 | 第63-64页 |
| ·农杆菌瞬时侵染介导对沉默周期的影响 | 第64-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| 附录 常用缓冲液及培养基的配制 | 第77-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第85页 |
