| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第16-24页 |
| 第一章 疱疹病毒UL25基因及其编码蛋白的研究进展 | 第16-24页 |
| 1.鸭瘟的简介 | 第16-17页 |
| 2.DPV的病原学概述 | 第17-20页 |
| ·DPV病毒粒子的形态结构 | 第17-18页 |
| ·DPV的分子生物学特征 | 第18-20页 |
| ·DPV的基因组特征 | 第18-19页 |
| ·病毒基因的转录、装配和释放 | 第19页 |
| ·病毒的囊膜糖蛋白和核衣壳 | 第19-20页 |
| 3.UL25基因的研究进展 | 第20-22页 |
| ·UL25基因序列的特点 | 第20-21页 |
| ·UL25基因的形态结构 | 第21-22页 |
| ·UL25基因产物的作用 | 第22页 |
| 4.展望 | 第22-23页 |
| 5.实验的目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 实验研究 | 第24-76页 |
| 第二章 鸭瘟病毒UL25基因的分子特征分析 | 第24-34页 |
| 1.材料和方法 | 第24-25页 |
| ·基因文库 | 第24页 |
| ·主要生物信息学分析软件 | 第24页 |
| ·DPV-CHv UL25基因序列生物信息学分析 | 第24-25页 |
| ·核酸序列生物信息学分析 | 第24页 |
| ·蛋白质序列的生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.结果 | 第25-32页 |
| ·DPV UL25基因的发现 | 第25页 |
| ·核酸序列的分子特性分析 | 第25页 |
| ·核苷酸序列特征分析 | 第25-26页 |
| ·蛋白质序列特征分析 | 第26-32页 |
| 3.讨论和小结 | 第32-34页 |
| 第三章 鸭瘟病毒UL25基因序列密码子偏爱性分析 | 第34-42页 |
| 1.材料与方法 | 第34-35页 |
| ·病毒种类与基因序列 | 第34-35页 |
| ·DPV UL25基因分子特征和系统进化树分析 | 第35页 |
| ·DPV和34株疱疹病毒UL25基因密码子使用分析 | 第35页 |
| ·DPV UL25基因密码子使用偏爱性的种系发生特性分析 | 第35页 |
| 2.结果 | 第35-40页 |
| ·DPV UL25基因特性 | 第35-36页 |
| ·DPV和参考疱疹病毒UL25基因密码子使用分析 | 第36-38页 |
| ·DPV UL25基因密码子使用偏爱和氨基酸组成差异 | 第38-39页 |
| ·DPV UL25基因与大肠杆菌、酵母及人的密码子使用偏爱性比较 | 第39-40页 |
| 3.讨论 | 第40-42页 |
| ·密码子使用与物种表达的相关性 | 第40页 |
| ·密码子使用与DPV物种归属的相关性 | 第40-41页 |
| ·密码子使用变异性与其影响因素的相关性 | 第41-42页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL25基因克隆、表达及多克隆抗体的制备 | 第42-58页 |
| 1.材料 | 第42-45页 |
| ·菌株/毒株/载体/疫苗 | 第42页 |
| ·实验动物 | 第42页 |
| ·主要试剂及配制 | 第42-44页 |
| ·制备鸭胚成纤维细胞相关溶液 | 第43页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE电泳相关液体 | 第43-44页 |
| ·质粒提取相关溶液 | 第44页 |
| ·Western-blot相关溶液 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·其它 | 第44-45页 |
| 2.实验方法 | 第45-50页 |
| ·PCR扩增鸭瘟病毒CHv株UL25基因 | 第45-46页 |
| ·引物的设计 | 第45页 |
| ·鸭胚成纤维细胞(DEF)的制备 | 第45页 |
| ·DPV接种鸭胚成纤维单层细胞 | 第45页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第45-46页 |
| ·Taq DNA Polymerase对DPV UL25基因的PCR扩增 | 第46页 |
| ·UL25基因的T-载体克隆与鉴定 | 第46页 |
| ·UL25基因的T-载体克隆 | 第46页 |
| ·重组质粒pMD18-T-UL25的鉴定 | 第46页 |
| ·表达载体的构建 | 第46页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白在宿主菌中的分布及诱导温度优化 | 第46-47页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第47页 |
| ·诱导时间的优化 | 第47页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第47-48页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第47-48页 |
| ·镍NTA琼脂糖凝胶FF过柱纯化重组蛋白 | 第48页 |
| ·兔高免血清的制备 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白疫苗的制备 | 第48页 |
| ·免疫程序 | 第48-49页 |
| ·Western-blot检测抗体特异性 | 第49页 |
| ·琼脂扩散实验检测兔抗UL25抗体效价 | 第49页 |
| ·兔抗UL25 IgG的纯化及鉴定 | 第49-50页 |
| ·辛酸-硫酸铵粗提兔抗UL25的IgG | 第49-50页 |
| ·High-Q阴离子交换层析纯化兔抗UL25的IgG | 第50页 |
| ·IgG纯度的鉴定 | 第50页 |
| 3.结果 | 第50-55页 |
| ·鸭瘟病毒UL25基因的扩增 | 第50页 |
| ·UL25基因的T-克隆与鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pMD18-T-UL25的序列测定 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pMD18-T-UL25的酶切及PCR鉴定 | 第51页 |
| ·重组表达质粒pET32-UL25的构建 | 第51页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第51-53页 |
| ·重组蛋白在宿主菌中的分布及诱导温度优化 | 第51-52页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第52-53页 |
| ·诱导时间的优化 | 第53页 |
| ·Western Blotting检测 | 第53页 |
| ·兔抗UL25血清琼脂扩散试验效价的检测 | 第53-54页 |
| ·兔抗UL25 IgG的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第54-55页 |
| 4.讨论 | 第55-58页 |
| ·UL25基因引物的设计和T克隆 | 第55页 |
| ·UL25基因的诱导表达 | 第55-56页 |
| ·抗血清的制备及纯化 | 第56-57页 |
| ·抗体制备的相关因素 | 第57-58页 |
| 第五章 鸭瘟病毒UL25基因产物在鸭胚成纤维细胞中的细胞定位和转录时相分析 | 第58-76页 |
| 1.材料 | 第58-59页 |
| ·菌株/毒株/载体/疫苗 | 第58页 |
| ·主要试剂及配制 | 第58页 |
| ·主要仪器设备 | 第58-59页 |
| 2.实验方法 | 第59-63页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的培养和病毒接种 | 第59页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL25基因产物细胞定位方法的建立及优化 | 第59-60页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL25基因产物细胞定位方法的建立 | 第59-60页 |
| ·间接免疫荧光检测方法条件的优化 | 第60页 |
| ·特异性检测 | 第60页 |
| ·结果判定标准 | 第60页 |
| ·DPV UL25基因产物细胞定位的动态监测 | 第60-61页 |
| ·荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测DPV UL25基因的转录时相 | 第61-63页 |
| ·FQ-PCR引物设计与合成 | 第61页 |
| ·引物的验证 | 第61页 |
| ·总RNA的抽提 | 第61-62页 |
| ·反转录实验 | 第62页 |
| ·样品测定 | 第62页 |
| ·统计分析 | 第62-63页 |
| 3.实验结果 | 第63-72页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL25基因产物细胞定位方法的建立及优化 | 第63-64页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL25基因产物细胞定位方法优化结果及抗体稀释度 | 第63-64页 |
| ·特异性实验 | 第64页 |
| ·DPV UL25基因产物细胞定位的动态监测 | 第64-67页 |
| ·转录时相 | 第67-72页 |
| ·引物合理性验证 | 第67-69页 |
| ·内参引物检测样品 | 第69页 |
| ·DPV UL25设计引物检测样品 | 第69-70页 |
| ·数据统计分析 | 第70-72页 |
| 4.讨论 | 第72-76页 |
| ·细胞定位 | 第72-74页 |
| ·关于蛋白定位研究的方法 | 第72页 |
| ·病毒UL25感染鸭胚成纤维细胞的定位分析 | 第72-73页 |
| ·关于DPV UL25在鸭胚成纤维细胞定位的时相分析 | 第73页 |
| ·DPV UL25鸭胚成纤维细胞定位与病毒增殖相关性的初步探讨 | 第73-74页 |
| ·转录时相 | 第74-76页 |
| ·实时荧光定量PCR对病毒在机体内增殖分布规律研究的优越性 | 第74-75页 |
| ·病毒UL25基因转录时相分析 | 第75-76页 |
| 第三部分 结论 | 第76-77页 |
| 第四部分 参考文献 | 第77-86页 |
| 作者简介 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
